이 가이드라인의 목적은 1.3항(적용범위)에서 정의한 생명공학의약품/생물의약품을 제조하는 데 사용할 사람 및 동물 세포주와 미생물 세포의 유래, 그리고 생산에 사용할 세포은행의 제조 및 특성분석에 관한 적절한 기준에 대해 폭넓은 지침을 제공하는 것이다. 따라서 이 문서는 이들 제품의 품목허가 신청 시 제출하여야 하는 이 분야의 정보에 관한 권고사항을 제시한다.

The objective of this guideline is to provide broad guidance on appropriate standards for the derivation of human and animal cell lines and microbial cells to be used to prepare biotechnological/biological products defined in Section 1.3, Scope, and for the preparation and characterisation of cell banks to be used for production. The document, therefore, provides recommendations on the information in these areas that should be presented in market applications for these products.

역사적으로, 세포 유래 생물의약품에 대한 일부 품질 우려는 외래성 오염물질의 존재 또는 제품 제조에 사용된 세포의 특성에서 비롯되었다. 재조합 DNA(rDNA) 유래 제품은 세포기질에 포함된 발현 구조체와 관련된 품질 우려도 안고 있다. 따라서 세포기질의 특성과 세포기질에 관련된 사건이 최종 제품의 품질과 안전성에 영향을 미칠 수 있으며, 나아가 이들 제품의 효과적인 품질관리를 위해서는 세포기질 취급의 모든 측면에 대해 적절한 관리가 필요하다는 것은 잘 확립되어 있다.

Historically, some quality concerns for cell-derived biological products have originated from the presence of adventitious contaminants or from the properties of the cells used to prepare the product. Recombinant DNA (rDNA)-derived products also carry quality concerns regarding the expression construct contained in the cell substrate. Thus, it is well established that the properties of the cell substrate and events linked to the cell substrate can affect resultant product quality and safety and, further, that effective quality control of these products requires appropriate controls on all aspects of handling the cell substrate.

이 문서는 다른 가이드라인을 보완하여, 후생동물 및 미생물 세포배양으로 제품을 제조하는 공정의 생물학적 측면에서 발생하는 품질 문제에 대한 포괄적인 접근법을 제공한다.

This document complements other guidelines to provide a comprehensive approach to quality issues arising from biological aspects of processing products from metazoan and microbial cell culture.

이 가이드라인은 세포은행 체계를 갖춘 세포기질을 대상으로 한다. 이 문서에서 "세포기질"이란 사람에게 생체내 또는 생체외(ex vivo)로 사용하기 위한 목적 생명공학의약품/생물의약품을 생성할 수 있는 완전한 능력을 지닌 미생물 세포 또는 사람이나 동물에서 유래한 세포주를 말한다. 체외진단용 시약은 이 문서의 적용범위에 속하지 않는다. 세포주의 동물 유래원에는 후생동물 기원의 모든 것이 포함된다. 생체외 수명이 무한한 연속 세포주와 생체외 수명이 유한한 이배체 세포가 모두 포함된다. 미생물 유래원에는 세균, 진균, 효모 및 그 밖의 단세포 생명체가 포함된다.

This guideline covers cell substrates having a cell banking system. In this document, “cell substrate” refers to microbial cells or cell lines derived from human or animal sources that possess the full potential for generation of the desired biotechnological/biological products for human in vivo or ex vivo use. Reagents for in vitro diagnostic use are outside the scope of this document. Animal sources of cell lines include all those of metazoan origin. Both continuous cell lines of indefinite in vitro lifespan and diploid cells of finite in vitro lifespan are included. Microbial sources include bacteria, fungi, yeast, and other unicellular life forms.

"생명공학의약품/생물의약품"이란 세포은행에서 배양한 세포로 제조한 모든 제품을 말하며, 다만 항생물질, 아미노산, 탄수화물 및 그 밖의 저분자 물질과 같은 미생물 대사산물은 제외한다. 유전자치료제 또는 백신의 제조에 사용하는 세포은행은 이 문서에 제시된 권고사항을 따라야 한다. 일부 바이러스 백신과 같은 일부 생물의약품은 동물의 조직 또는 장기에서 직접 유래한 일차 세포배양으로 제조된다. 일차 세포는 은행화되지 않으므로 이 문서에서 다루지 않는다. 그러나 일차 세포에 적용될 수 있는 그 밖의 고려사항은 이 문서의 부록 1에서 추가로 논의한다.

“Biotechnological/biological products” refers to any products prepared from cells cultivated from cell banks with the exception of microbial metabolites such as, for example, antibiotics, amino acids, carbohydrates, and other low molecular weight substances. Cell banks used to prepare gene therapy products or vaccines should follow the recommendations presented in this document. Some biological products, such as certain viral vaccines, are prepared in primary cell cultures derived directly from animal tissues or organs. Primary cells are not banked and therefore are not addressed by this document. However, other considerations which may apply to primary cells are discussed further in Appendix 1 of this document.

생명공학의약품/생물의약품의 제조에 사용되는 세포기질의 이력과, 그 세포기질이 전부 또는 일부 유래한 모세포주의 이력을 기술하는 근거 문서를 제공하는 것이 중요하다. 세포기질의 연구 및 개발 단계에서 일어난 사건은 해당 세포기질을 생산에 사용하는 것과 관련된 위험의 평가에 크게 기여할 수 있다. 이와 관련하여 제공되는 정보는 제품의 품질과 안전성을 보증하는 종합적인 평가를 용이하게 하기 위한 것이다.

It is important to provide supportive documentation which describes the history of the cell substrate that is used in the manufacture of a biotechnological/biological product, as well as any parental cell line from which it was totally or partially derived. Events during the research and development phases of the cell substrate may contribute significantly to assessment of the risks associated with the use of that particular cell substrate for production. The information supplied in this regard is meant to facilitate an overall evaluation which will ensure the quality and safety of the product.

세포기질의 조작에 관한 기록은 개발 전 과정에 걸쳐 주의 깊게 유지하여야 한다. 세포 이력의 기술은 세포기질 특성분석에 사용되는 여러 도구 중 하나일 뿐이다. 일반적으로 문서화된 이력의 미비 자체가 제품 허가의 장애가 되지는 않을 수 있으나, 미비가 광범위하면 세포기질 특성분석에서 다른 방법에 더 많이 의존하게 될 것이다.

Careful records of the manipulation of the cell substrate should be maintained throughout its development. Description of cell history is only one tool of many used for cell substrate characterisation. In general, deficiencies in documented history may not, by itself, be an impediment to product approval, but extensive deficiencies will result in increased reliance on other methods to characterise the cell substrate.

세포기질이 유래한 세포의 유래원(실험실 또는 세포주 보존기관)을 명시하고, 관련 과학 문헌을 인용하여야 한다. 유래원 실험실에서 직접 얻은 정보가 바람직하다. 이를 얻을 수 없는 경우에는 문헌을 참고할 수 있다.

The source of cells (laboratory or culture collection) from which the cell substrate was derived should be stated, and relevant references from the scientific literature should be cited. Information obtained directly from the source laboratory is preferred. When this is not available, literature references may be utilised.

사람 세포주의 경우, 최초 공여자의 다음 특성을 기술하는 것이 적절하다: 기원 조직 또는 장기, 민족적·지리적 기원, 연령, 성별 및 전반적인 생리적 상태. 알려져 있는 경우, 공여자의 건강 상태 또는 병력을 공여자에 대해 실시한 병원체 시험 결과와 함께 보고하여야 한다. 특히 사람 이배체 섬유아세포의 경우, 공여자의 연령이 세포주의 생체외 수명에 영향을 미칠 수 있으므로, 이 정보가 있으면 제공하여야 한다. 동물 세포주의 경우, 유래원에 관한 적절한 기술에는 종, 계통, 사육 조건, 기원 조직 또는 장기, 지리적 기원, 연령 및 성별, 병원체 시험 결과, 그리고 최초 공여 동물의 전반적인 생리적 상태가 포함된다.

For human cell lines, it is relevant to describe the following characteristics of the original donor: Tissue or organ of origin, ethnic and geographical origin, age, sex and general physiological condition. If known, the state of health or medical history of the donor should be reported along with the results of any tests of the donor for pathogenic agents. Specifically for human diploid fibroblasts, the age of the donor may influence the in vitro lifespan of the cell line and this information should be provided if available. For animal cell lines, relevant descriptions of the source include species, strains, breeding conditions, tissue or organ of origin, geographical origin, age and sex, the results of tests for pathogenic agents, and general physiological condition of the original donor.

미생물의 경우, 제조업자는 세포기질이 유래한 생물체의 종, 균주 및 알려진 유전형·표현형 특성을 기술하여야 한다. 제조업자는 병원성, 독소 생성 및 그 밖의 생물학적 위해 정보가 있으면 이 또한 기술하여야 한다.

For microbes, manufacturers should describe the species, strain, and known genotypic and phenotypic characteristics of the organism from which the cell substrate was derived. Manufacturers should also describe the pathogenicity, toxin production, and other biohazard information, if any.

세포의 배양 이력을 문서화하여야 한다. 세포를 처음 분리할 때 사용한 방법과, 세포를 시험관내에서 배양하는 데 사용한 절차 및 세포주를 확립하는 데 사용한 모든 절차(예: 물리적·화학적·생물학적 절차의 사용 또는 뉴클레오티드 서열의 추가)를 기술하여야 한다. 모든 유전적 조작 또는 선별에 관한 기술을 제공하여야 한다. 이들 세포의 확인, 특성, 그리고 내재성 인자 및 외래성 인자에 대한 시험 결과에 관하여 이용 가능한 모든 정보를 제공하여야 한다.

The cultivation history of the cells should be documented. The method originally used for the isolation of the cells should be described as well as the procedures used in the culturing of the cells in vitro and any procedures used to establish cell lines (for example, use of any physical, chemical, or biological procedure, or added nucleotide sequences). A description of any genetic manipulation or selection should be provided. All available information regarding the identification, characteristics, and results of testing of these cells for endogenous and adventitious agents should be provided.

후생동물 기원의 연속 세포주의 경우, 일반적으로 집단배가 횟수, 정해진 희석 비율에서의 계대배양 횟수 또는 일수 중 하나를 추정하여 배양 기간을 정량하는 것으로 충분하다. 생체외 수명이 유한한 이배체 세포주의 경우, 연구, 개발 및 제조의 모든 단계에서 집단배가 횟수를 정확하게 추정하는 것이 중요하다. 미생물 세포의 경우, 세포기질 생성 이후의 계대배양 빈도를 문서화하는 것으로 충분한 것으로 본다.

For continuous cell lines of metazoan origin, it is usually adequate to quantitate culture duration by estimation of either number of population doublings, or number of subcultivations at defined dilution ratio, or time in days. For diploid cell lines possessing finite in vitro lifespan, accurate estimation of the number of population doublings during all stages of research, development, and manufacturing is important. For microbial cells, documentation of subcultivation frequency after cell substrate generation is considered adequate.

세포기질의 생성과 관련하여, 신청자는 감염성 인자에 노출될 수 있는 절차에 대해 충분히 논의하여야 한다. 배양 배지의 구성 성분을 기술하여야 하며, 특히 혈청, 효소, 가수분해물 또는 그 밖의 살아 있는 세포와 같은 사람 또는 동물 유래 물질에 대한 세포의 노출에 관한 정보를 기술하여야 한다. 이 기술에는 유래원, 제조 및 관리 방법, 시험 결과 및 품질보증이 포함되어야 한다. 이러한 사항에 관한 관련 문헌이 있으면 인용할 수 있다. 이 정보는 이러한 유래원으로부터 외래성 인자가 유입될 수 있는 경로를 상세히 분석할 수 있게 하며, 제품의 위험-유익성 분석의 일부가 된다.

Regarding the generation of cell substrates, applicants should provide a thorough discussion of procedures which would provide exposure to infectious agents. Constituents of the culture medium should be described, in particular, information regarding exposure of the cells to materials of human or animal origin such as serum, enzymes, hydrolysates, or other living cells. The description should include the source, method of preparation and control, test results, and quality assurance. Relevant literature on these points may be referenced when available. This information will allow a detailed analysis of potential entry routes for adventitious agents from these sources, and will be part of the risk-benefit analysis of the product.

적합한 모세포주의 선택은 결정적인 단계이다. 재조합 제품의 경우, 모세포주는 일반적으로 형질감염되지 않은 수용 세포주이다. 특성분석된 모세포은행의 사용이 권장되나, 필수적인 것으로 보지는 않는다. 특성분석된 모세포은행은 마스터세포은행(MCB)의 품질 평가의 근거가 될 수 있는 일련의 정보를 제공함으로써, 특히 동일한 모세포 유형으로부터 여러 세포기질을 생성하는 경우에 유익할 수 있다. 예를 들어, 골수종 세포주를 하이브리도마의 모세포주로 은행화할 수 있다.

A crucial step is the choice of a suitable parental cell line. For recombinant products, a parental cell line is typically the untransfected recipient cell line. The use of characterised parental cell banks is suggested, but is not considered essential. A characterised parental cell bank may be of benefit, especially when multiple cell substrates are generated from the same parental cell type, by providing a set of information on which the quality assessment of the Master Cell Bank (MCB) can be based. For example, the myeloma cell line may be banked as a parental cell line for hybridomas.

세포기질을 생성하는 동안 원하는 특성을 최종적으로 얻기 위하여 하나 이상의 특정 절차를 사용할 수 있다. 여기에는 예를 들어 세포 융합, 형질감염, 선별, 콜로니 분리, 클로닝, 유전자 증폭, 그리고 특정 배양 조건 또는 배지에 대한 적응이 포함될 수 있다. 세포기질 개발에 사용된 방법에 관한 정보는 세포기질의 이력을 명확히 이해하는 데 도움이 될 수 있다. 사람 이배체 섬유아세포와 같은 일부 세포기질은 세포은행 제조 전에 광범위한 조작이나 클로닝이 필요하지 않을 수 있다.

During the generation of the cell substrate, one or more specific procedures may be utilised in the ultimate development of the desired characteristics. These may include, for example, cell fusion, transfection, selection, colony isolation, cloning, gene amplification, and adaptation to specific culture conditions or media. Information regarding the methodologies utilised in developing the cell substrate can help to provide a clear understanding of the history of the cell substrate. Some cell substrates such as human diploid fibroblasts may not need extensive manipulation or cloning prior to cell banking.

재조합 제품의 경우, 세포기질은 원하는 서열을 포함하는 형질감염 세포로서, 단일 세포 전구체로부터 클로닝된 것이다. rDNA로 변형된 세포기질의 생성에 관한 추가 정보는 그 밖의 관련(예: 지역 또는 국제) 가이드라인을 참고한다. 비재조합 제품 또는 비재조합 백신의 경우, 세포기질은 MCB 제조를 위해 선택한 모세포주의 세포로서 추가 변형을 거치지 않은 것이다. 하이브리도마 유래 제품의 경우, 세포기질은 모 골수종 세포주를 다른 모세포(예: 면역 비장세포)와 융합하여 얻은 하이브리도마 세포주이다.

For recombinant products, the cell substrate is the transfected cell containing the desired sequences, which has been cloned from a single cell progenitor. For further information on generation of rDNA-modified cell substrates, consult other relevant (e.g., regional or international) guidelines. For non-recombinant products or non-recombinant vaccines, the cell substrate is the cell from the parental cell line chosen for preparation of the MCB without further modification. For products derived from hybridomas, the cell substrate is the hybridoma cell line derived by fusion of the parental myeloma cell line with other parental cells, e.g., immune spleen cells.

연속 계대배양한 세포를 사용하여 생명공학의약품/생물의약품을 생산하는 가장 중요한 이점 중 하나는 각 생산 로트에 대해 특성분석된 공통의 출발 원천, 즉 보존된 세포은행을 가질 수 있다는 것이다. 제조업자는 자체적으로 세포은행을 제조하거나 외부 출처로부터 확보할 수 있다. 제조업자는 각 세포은행의 품질과 각 세포은행에 대해 실시한 시험의 품질을 보증할 책임이 있다.

One of the most important advantages of using serially subcultivated cells to produce biotechnological/biological products is the ability to have a characterised common starting source for each production lot, i.e., the preserved bank of cells. Manufacturers may prepare their own cell banks, or may obtain them from external sources. Manufacturers are responsible for ensuring the quality of each cell bank and of the testing performed on each bank.

MCB를 사용하여 제조용세포은행(WCB)을 생성하는 2단계 세포은행 개념은 제품의 지속적인 제조를 위해 세포기질을 공급하는 가장 실용적인 접근법으로 일반적으로 인정된다. 제조업자는 세포은행으로부터 세포를 지속적으로 공급하기 위한 전략을 기술하여야 하며, 여기에는 생산을 위한 세포은행의 예상 사용 속도, 새 세포은행 생성 간의 예상 간격, 세포은행의 적격성 평가 기준이 포함된다.

The concept of a two-tiered cell bank, in which the MCB which is used to generate Working Cell Banks (WCBs), is generally accepted as the most practical approach to providing a supply of cell substrate for continued manufacture of the product. Manufacturers should describe their strategy for providing a continued supply of cells from their cell bank(s), including the anticipated utilisation rate of the cell bank(s) for production, the expected intervals between generation of new cell bank(s), and the criteria for qualification of cell bank(s).

일반적으로 MCB를 먼저 제조하며, 대개 초기 클론에서 직접, 또는 초기 클론에서 유래한 예비 세포은행으로부터 제조한다. 특정 유형의 세포(예: 제한된 생체외 수명 또는 그 밖의 기술적 요인으로 세포 클로닝이 실용적이지 않은 이배체 세포)이거나, 클로닝하지 않은 세포 집단이 의도한 용도에 대해 이미 충분히 균질한 경우에는 클론으로부터 세포은행을 제조할 필요가 없는 것으로 본다.

Generally, the MCB is made first, usually directly from an initial clone or from a preliminary cell bank derived from an initial clone. It is not considered necessary to prepare cell banks from clones for certain types of cells (e.g., diploid cells, where limited in vitro life span or other technical factors make cell cloning impractical) or where the uncloned cell population is already adequately homogeneous for the intended use.

WCB는 MCB의 용기 하나 이상으로부터 유래한다. 제조공정에 세포를 직접 공급하는 데 일반적으로 사용되는 것은 WCB이다. 추가 WCB는 필요에 따라 MCB로부터 생성한다. 새로 제조한 WCB는 특성분석과 시험을 통해 적절히 적격성 평가를 하여야 한다.

A WCB is derived from one or more containers of the MCB. It is the WCB which is typically used to directly provide cells for the manufacturing process. Additional WCBs are generated from the MCB as needed. A newly prepared WCB should be appropriately qualified by characterisation and testing.

MCB와 WCB는 배양 성분 및 배양 조건 등 특정 측면에서 서로 다를 수 있다는 점에 유의하여야 한다. 마찬가지로, MCB와 WCB 제조에 사용한 배양 조건은 생산 공정에 사용하는 배양 조건과 다를 수 있다. 세포배양 공정의 변경이 제품 품질에 영향을 미치지 않는다면, 세포를 다시 클로닝하거나 MCB 또는 WCB를 다시 은행화할 필요는 없는 것으로 본다. 특성분석된 세포은행이 일관된 제품을 제공하는 것이 중요하다.

It should be noted that the MCB and WCB may differ from each other in certain respects, e.g., culture components and culture conditions. Similarly, the culture conditions used to prepare the MCB and WCB may differ from those used for the production process. If changes in cell culture process do not affect product quality, it is not considered necessary to reclone the cells or to rebank the MCB or WCB. It is important that a characterised bank provides a consistent product.

예를 들어 목적 제품 생산에 매년 비교적 적은 수의 용기만 필요한 경우에는, WCB 없이 MCB만으로 구성된 1단계 세포은행 체계를 원칙적으로 사용할 수 있다.

A single-tiered banking system consisting only of the MCB but no WCBs could be used in principle, for example, if relatively few containers were needed each year to produce the desired product.

일부 미생물 발현계에서는 새로운 세포기질 용기 로트마다 새로 형질전환을 실시하는데, 이는 새로운 형질전환마다 충분히 시험된 숙주세포은행 및 플라스미드은행의 분주물을 사용하고 형질전환된 각 세포기질 은행을 시험하는 것에 근거한다. 이 형질전환된 세포기질 은행을 MCB로 보며, 이를 생산용 세포기질의 원천으로 사용한다. 숙주세포은행, 플라스미드은행 및 MCB는 적절한 보존 방법으로 유지한다. 세균과 효모의 형질전환은 후생동물 세포의 형질감염에 필요한 과정과 달리 일반적으로 재현성이 매우 높고 쉽게 수행되는 과정이므로, 이 대체 체계는 적절한 것으로 본다. 제조업자는 숙주세포, rDNA 분자(예: 플라스미드), 형질전환 및 세포은행 제조 방법, 그리고 특성분석 연구 결과에 관한 정보를 제공하여야 한다.

In some microbial expression systems, a new transformation is performed for each new cell substrate container lot, based upon using aliquots of thoroughly tested host cell banks and plasmid banks for each new transformation and on testing of each transformed cell substrate bank. This transformed cell substrate bank is considered the MCB, and it is used as the source of cell substrate for production. Host cell banks, plasmid banks, and MCBs are maintained by appropriate preservation methods. This alternative system is considered adequate because the transformation of bacteria and yeast is generally a very reproducible and easily performed process, unlike the events needed for transfection of metazoan cells. Manufacturers should provide information on the host cells, rDNA molecules (such as plasmids), method of transformation and of cell banking, and the results of characterisation studies.

오염된 세포기질(또는 세포은행)이 생산에 사용되는 것을 방지하고, 오염으로 사용할 수 없게 된 세포은행을 다시 만들어야 하는 데 따른 제품 공급 차질 또는 개발 기간 손실을 피하는 것이 중요하다. 어떠한 세포은행 시험 체계도 잠재적 오염물질을 모두 검출할 수는 없는 것으로 인정되므로, 오염이 없음을 합리적으로 보증하고 신뢰할 수 있는 세포기질 원천을 제공하기 위해서는 세포은행 제조 시 이러한 예방 원칙을 적용하는 것이 중요하다.

It is important to prevent a contaminated cell substrate (or bank) from being used in production and to avoid a loss of product availability or development time resulting from the need to recreate a cell bank found to be unusable due to contamination. It is recognised that no cell bank testing regimen is able to detect all potential contaminants; therefore, use of these preventive principles during cell banking is important to provide reasonable assurance of the absence of contamination and to provide a reliable source of the cell substrate.

제조업자는 사용한 세포은행 체계의 유형, 세포은행의 크기, 사용한 용기(바이알, 앰플 또는 그 밖의 적절한 용기) 및 마개 시스템, 사용한 동결보호제 및 배지를 포함한 세포은행 제조 방법, 그리고 동결보존 및 보관 조건을 기술하여야 한다.

Manufacturers should describe the type of banking system used, the size of the cell bank(s), the container (vials, ampoules, or other appropriate vessels) and closure system used, the methods used for preparation of the cell bank(s) including the cryoprotectants and media used, and the conditions employed for cryopreservation and storage.

제조업자는 미생물 오염과 실험실 내에 있는 다른 세포 유형에 의한 교차오염을 방지하기 위해 사용하는 절차와 세포은행 용기를 추적할 수 있게 하는 절차를 기술하여야 한다. 여기에는 문서화 체계에 관한 기술과, 보존, 보관 및 보관 후 회수 과정을 거치더라도 용기의 표시 정보가 손실되지 않는 표시 체계에 관한 기술이 포함되어야 한다.

Manufacturers should describe the procedures used to avoid microbial contamination and cross-contamination by other cell types present in the laboratory, and the procedures that allow the cell bank containers to be traced. This should include a description of the documentation system as well as that of a labelling system which can withstand the process of preservation, storage, and recovery from storage without loss of labelling information on the container.

제조업자는 세포은행 제조 절차를 기술하여야 한다. 세포은행용 세포는 일반적으로 은행에 필요한 충분한 수의 용기를 만들 수 있는 세포 풀을 얻을 때까지 점차 더 많은 수 또는 더 큰 크기의 용기로 배양을 확장하여 준비한다. 각 용기 내용물의 균일한 조성을 보증하기 위하여, 둘 이상의 배양 용기를 사용하는 경우에는 모든 배양 용기의 세포를 합하여 세포은행용 단일 세포 풀을 준비하여야 한다.

Manufacturers should describe their cell banking procedures. Cells are generally prepared for banking by expanding cultures in a progressively greater number or larger size of vessel until a pool of cells can be obtained which is sufficient to generate enough containers for the bank. To ensure the uniform composition of the contents of each container, a single pool of cells for banking should be prepared by combining the cells from all of the culture vessels, if more than one vessel is used.

보존 배지에 현탁한 세포를 단일 풀에서 멸균된 용기로 분주한 후, 용기를 밀봉하여 적절한 조건에서 보관한다. 예를 들어, 동결보호제가 들어 있는 배지 중의 동물 세포를 밀봉 용기에 담아 규정되고 관리된 조건에서 동결한 다음, 액체질소의 기상 또는 액상, 또는 이에 상응하는 초저온에서 보관하도록 옮긴다. 사용하는 생물체에 따라 다른 보존 및 보관 방법도 적절할 수 있으나, 이 방법은 재구성 시 일관되고 생산에 사용하기에 충분한 수준의 세포 생존율을 유지할 수 있어야 한다.

Cells suspended in preservation medium are aliquoted from the single pool into sterilised containers which are then sealed and stored under appropriate conditions. For example, animal cells in media containing a cryoprotectant are frozen in the sealed containers under defined and controlled conditions, and then transferred to storage in the vapor or liquid phase of liquid nitrogen or at equivalent ultra low temperatures. Other methods of preservation and storage may be adequate depending on the organism used, but they should be capable of maintaining a level of cell viability upon reconstitution which is both consistent and adequate for production use.

의약품의 지속적이고 중단 없는 생산을 보장하기 위하여, 제조업자는 세포은행을 사용할 수 없게 만들 수 있는 재해성 사건으로부터 보호하기 위해 취할 수 있는 조치를 신중히 고려하여야 한다. 이러한 사건의 예로는 화재, 정전 및 인적 오류가 있다. 제조업자는 이러한 예방 조치에 관한 계획을 기술하여야 하며, 예를 들어 여러 냉동고에 세포은행 용기를 분산 보관하는 이중화, 예비 전원의 사용, 보관 장치에 대한 액체질소 자동 충전 시스템의 사용, MCB 및 WCB 일부의 원격지 보관, 또는 MCB의 재생성이 포함될 수 있다.

To ensure continuous, uninterrupted production of pharmaceuticals, manufacturers should carefully consider the steps that can be taken to provide for protection from catastrophic events that could render the cell bank unusable. Examples of these events include fires, power outages and human error. Manufacturers should describe their plans for such precautions; for example, these may include redundancy in the storage of bank containers in multiple freezers, use of back-up power, use of automatic liquid nitrogen fill systems for storage units, storage of a portion of the MCB and WCB at remote sites, or regeneration of the MCB.

제조 중 생체외 세포연령 추정의 기준 출발점은 MCB 용기 하나 이상의 해동 시점이어야 한다. 이배체 세포주의 경우, 생체외 수명은 집단배가 수준으로 추정하여야 한다. 이배체 세포에 대해서는 노화가 일어나는 집단배가 수준을 결정하여야 한다.

The starting point of reference for estimates of in vitro cell age during manufacturing should be the thawing of one or more containers of the MCB. For diploid cell lines, in vitro lifespan should be estimated in terms of population doubling levels. The population doubling level at which senescence occurs should be determined for diploid cells.

은행화된 세포기질의 특성분석과 시험은 생명공학의약품 및 생물의약품 관리의 핵심 요소이다. MCB의 특성분석을 통해 제조업자는 이 원천에 대해 다른 세포주 세포, 외래성 인자, 내재성 인자 및 분자 오염물질(예: 숙주 생물체 유래 독소 또는 항생물질)의 존재 여부를 평가할 수 있다. 이 시험의 목적은 세포기질의 확인, 순도 및 제조용으로서의 적합성을 확인하는 것이다. 경우에 따라서는 종양원성 또는 핵형분석과 같은 추가 시험이 유용할 수 있다. 특정 세포기질에 대해 선택하는 시험 프로그램은 세포의 생물학적 특성(예: 증식 요구조건), 배양 이력(사람 유래 및 동물 유래 생물학적 시약의 사용 포함) 및 이용 가능한 시험 절차에 따라 달라진다. 세포기질의 특성분석 정도는 이후 제조 단계에서 필요한 일상 시험의 종류나 수준에 영향을 미칠 수 있다.

The characterisation and testing of banked cell substrates is a critical component of the control of biotechnological and biological products. Characterisation of the MCB allows the manufacturer to assess this source with regard to presence of cells from other lines, adventitious agents, endogenous agents and molecular contaminants (e.g., toxins or antibiotics from the host organism). The objective of this testing is to confirm the identity, purity, and suitability of the cell substrate for manufacturing use. In some cases, additional testing such as tumorigenicity or karyology may be useful. The testing program chosen for a given cell substrate will vary according to the biological properties of the cells (for example, growth requirements), its cultivation history (including use of human-derived and animal-derived biological reagents) and available testing procedures. The extent of characterisation of a cell substrate may influence the type or level of routine testing needed at later stages of manufacturing.

제조업자는 각 MCB에 대해 확인시험 및 순도시험을 1회 실시하고, 등록할 각 제품에 대해 세포 배양 중 안정성 시험을 1회 실시하여야 한다. 또한 각 WCB에 대해 순도시험과 제한된 확인시험을 1회 실시하여야 한다. 아울러 신청자는 바이러스 안전성에 관한 ICH 가이드라인을 참고하여야 한다. 아래에 기술한 시험 중 해당하는 시험을 실시하고, 그 결과와 함께 품목허가 신청서에 기술하여야 한다.

Manufacturers should perform tests for identity and purity once for each MCB, and tests of stability during cell cultivation once for each product to be registered. In addition, tests of purity and limited tests of identity should be performed once on each WCB. Also, applicants should consult the ICH guideline on viral safety. Relevant tests among those described below should be performed and described in the market application, along with the results of the testing.

외부에서 조립한 발현 구조체를 포함하는 세포주의 경우, 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열의 특성분석에 관한 지침은 rDNA 발현 구조체에 관한 해당 ICH 가이드라인을 참고하여야 한다. 유전자 서열이 특성분석되어 잘 이해되어 있는 일부 비재조합 DNA 유래 세포주에서도 유사한 방법으로 암호화 서열을 조사하는 것이 유용할 수 있다. 그러나 복합 천연 산물, 예를 들어 관련 유전자 산물군, 미생물 백신 항원 또는 하이브리도마 유래 단클론항체를 암호화하는 서열까지 조사할 필요는 없는 것으로 본다.

For cell lines containing exogenously assembled expression constructs, the relevant ICH guideline on rDNA expression constructs should be consulted for guidance on the characterisation of nucleotide and amino acid sequences. It may also be useful to examine, by similar methods, the coding sequences in some non-recombinant DNA-derived cell lines where the gene sequences have been characterised and are well understood. However, it is not considered necessary to carry out investigations of the sequences encoding complex natural products, for example, families of related gene products, microbial vaccine antigens, or monoclonal antibodies from hybridomas.

또한 제조업자는 새로운 방법의 특이성, 감도 및 정밀성이 기존 방법과 적어도 동등하다면, 세포기질 특성분석 및 시험에서 "최신" 방법과 기술 개선을 이용할 수 있게 되는 대로 활용하도록 권장된다.

Manufacturers are also encouraged to employ “state-of-the-art” methods and technological improvements in cell substrate characterisation and testing as they become available, as long as the specificity, sensitivity, and precision of the newer methods are at least equivalent to those of existing methods.

타당한 근거가 있는 경우, 제조업자는 MCB 대신 WCB를 특성분석하기로 선택할 수 있다.

The manufacturer may choose to characterise the WCB instead of the MCB, if justified.

은행화된 세포가 표시된 바로 그 세포인지 확인하기 위하여 적절한 시험을 실시하여야 한다. 확인시험에는 표현형 특성 또는 유전형 특성 중 어느 것이든 사용할 수 있다. 가능한 모든 시험을 실시할 필요는 없는 것으로 본다. 확인시험은 일반적으로 MCB에 대해 실시한다. 또한 각 WCB에 대해서는 일반적으로 제한된 확인시험을 실시한다.

Appropriate tests should be performed to determine that the banked cell is what it is represented to be. Either phenotypic or genotypic characteristics may be used in identity testing. It is not considered necessary to do all the possible tests. Tests of identity are generally performed on the MCB. In addition, limited identity testing is generally performed on each WCB.

기질에 부착하여 증식하는 사람 또는 동물 세포의 경우, 형태학적 분석은 다른 시험과 함께 사용하면 유용한 도구가 될 수 있다. 대부분의 경우, 사람 또는 동물 유래 세포주의 기원 종을 확인하는 데에는 동위효소 분석으로 충분하며, 세포주의 이력에 따라 다른 시험이 적절할 수도 있다. 기원 종을 확인하기 위하여 예를 들어 분염 세포유전학 또는 종 특이 항혈청의 사용을 포함한 다른 기술로 대체할 수 있다. 대안적 전략으로, 예를 들어 분염 세포유전학으로 고유 표지 염색체를 검출하거나, DNA 분석으로 유전체 다형성 양상(예: 제한효소 절편 길이 다형성, 가변 수 직렬 반복, 유전체 이뉴클레오티드 반복)을 검출하여 고유 표지자의 존재를 입증할 수 있다. 기원 종의 확인 또는 알려진 고유 세포주 표지자의 존재 확인 중 어느 하나이면 적절한 확인시험으로 본다.

For human or animal cells which grow attached to a substratum, morphological analysis may be a useful tool in conjunction with other tests. In most cases, isoenzyme analysis is sufficient to confirm the species of origin for cell lines derived from human or animal sources; other tests may be appropriate depending on the history of the cell line. Other technologies may be substituted to confirm species of origin, including, for example, banding cytogenetics or use of species-specific antisera. An alternative strategy would be to demonstrate the presence of unique markers, for example, by using banding cytogenetics to detect a unique marker chromosome, or DNA analysis to detect a genomic polymorphism pattern (for example, restriction fragment length polymorphism, variable number of tandem repeats, or genomic dinucleotide repeats). Either confirmation of species of origin or presence of known unique cell line markers is considered an adequate test of identity.

목적 제품의 발현은 확인을 보완하는 접근법이 될 수 있다.

Expression of the desired product may represent a complementary approach to confirmation of identity.

대부분의 미생물 세포의 경우, 숙주세포은행과 형질전환 세포은행에 대해 종 수준에서 숙주세포를 확인하는 데에는 선택 배지에서의 증식 분석으로 대개 충분하다. 다양한 균주가 사용될 수 있는 E. coli의 경우, 파지 타이핑과 같은 생물학적 특성분석 방법을 보조 확인시험으로 고려하여야 한다. 플라스미드은행의 경우, 발현 구조체 분석에 관한 ICH 문서에 기술된 바와 같이 확인 평가를 수행할 수 있다. 목적 제품의 발현 또한 미생물 발현계의 확인에 적절한 것으로 본다.

For most microbial cells, analysis of growth on selective media is usually adequate to confirm host cell identity at the species level for the host cell bank and the transformed cell bank. For E. coli, where a variety of strains may be used, biological characterisation methods such as phage typing should be considered as supplementary tests of identity. For plasmid banks, identity assessment can be accomplished as described by the ICH document on analysis of the expression construct. Expression of the desired product is also considered adequate to confirm the identity of the microbial expression system.

세포 개발 및 세포은행 제조의 핵심 측면은 MCB와 WCB가 생물학적으로 순수한지, 즉 외래성 미생물 인자와 외래성 세포 오염물질이 없는지를 평가하는 것이다. 이 시험을 계획하고 실시할 때에는 선택 물질과 항생물질이 외래성 미생물 오염물질의 검출에 미치는 영향을 고려하여야 한다.

A critical aspect of cell development and banking is the assessment that the MCB and WCB are biologically pure, i.e., are free from adventitious microbial agents and adventitious cellular contaminants. The impact of selective agents and antibiotics on the detection of adventitious microbial contaminants should be considered when planning and performing these tests.

바이오버든(세균 및 진균) 존재 여부에 대한 시험은 MCB와 WCB의 개별 용기(전체 수의 1%, 다만 2개 이상)에 대해 실시하여야 한다. 그 밖의 모든 측면에서는, 미생물 한도 또는 미생물 무균 시험에 관하여 유럽약전(Ph. Eur.), 일본약국방(JP) 또는 미국약전(U.S.P.)에 기술된 현행 방법을 적절한 것으로 볼 수 있다.

Tests for the presence of bioburden (bacteria and fungi) should be performed on individual containers (1% of the total number but not less than two containers) of the MCB and WCB. In all other aspects, the current methodologies described in either the European Pharmacopoeia (Ph. Eur.), the Japanese Pharmacopoeia (JP) or the U.S. Pharmacopoeia (U.S.P.) for testing microbial limits or microbial sterility may be considered adequate.

마이코플라스마 존재 여부에 대한 시험은 MCB와 WCB에 대해 실시하여야 한다. 현재 적절한 것으로 보는 절차에는 한천 배지 및 액체 배지 절차와 지시세포 배양 절차가 모두 포함된다. 현행 마이코플라스마 시험 방법은 Ph. Eur., JP 및 "Points to Consider in the Characterisation of Cell Lines Used to Produce Biologicals"(FDA, CBER, 1993)에 기술되어 있다. 일반적으로 단일 용기에서 유래한 세포를 시험하는 것으로 충분한 것으로 본다. 포유류가 아닌 동물 세포주의 경우 대체 대조 및/또는 시험 조건이 적절할 수 있으며, 제조업자는 적절한 방법에 대해 국가/지역 규제당국과 협의하여야 한다.

Tests for the presence of mycoplasma should be performed on the MCB and WCB. Current procedures considered adequate include both the agar and broth media procedures as well as the indicator cell culture procedure. Current methods for mycoplasma testing are described in Ph. Eur., JP, and “Points to Consider in the Characterisation of Cell Lines Used to Produce Biologicals” (FDA, CBER, 1993). Testing cells derived from a single container is generally considered adequate. For non-mammalian animal cell lines, alternative controls and/or assay conditions may be appropriate; manufacturers should consult with the national/regional regulatory authority for appropriate methodology.

향후 바이오버든 및 마이코플라스마 시험의 조화 노력이 결실을 맺으면, 과학적으로 적절한 조화된 시험법을 사용하여야 한다.

If future efforts to harmonize bioburden and mycoplasma assays are fruitful, then the scientifically appropriate harmonized assay should be used.

세포기질의 바이러스 시험은 오염 가능성이 있는 바이러스를 검출하기 위하여, 세포주의 배양 이력에 근거한 적절한 선별시험과 관련 특이 시험을 사용하여 광범위한 바이러스를 검출할 수 있도록 설계하여야 한다. 신청자는 바이러스 안전성에 관한 ICH 가이드라인을 참고하여야 한다. 바이러스 안전성 가이드라인이 다루지 않는 제품군의 경우, 동물 세포 사용에 관한 현행 세계보건기구(WHO) 문서를 참고할 수 있다.

Virus testing of cell substrates should be designed to detect a wide spectrum of viruses by using appropriate screening tests and relevant specific tests, based on the cultivation history of the cell line, to detect possible contaminating viruses. Applicants should consult the ICH guideline on viral safety. For product classes not covered by the viral safety guideline, the current World Health Organization (WHO) documents for use of animal cells may be consulted.

세포기질의 순도는 기원 종이 같거나 다른 세포주에 의한 오염으로 손상될 수 있다. 실시할 시험의 선택은 다른 세포주에 의한 교차오염의 기회가 있었는지에 따라 달라진다. 경우에 따라서는 같은 실험실에서 서로 다른 세포주의 배양을 유지해야 할 수도 있다. 세포은행 제조 절차 중 개방 조작을 수행하는 동안에는 교차오염을 방지하기 위하여 다른 세포주의 개방 조작을 동시에 수행하지 않도록 주의하여야 한다. 개방식 세포은행 제조 절차(예: 선택한 세포주의 세포 확장, 풀링 또는 분주)를 수행하는 동안 세포은행 제조실에 다른 세포주가 함께 있었던 경우에는 언제나, 세포은행에 대해 두 번째 세포주의 세포(또는 그 유래 산물)의 존재 여부를 시험하여야 한다.

The purity of cell substrates can be compromised through contamination by cell lines of the same or different species of origin. The choice of tests to be performed depends upon whether opportunities have existed for cross-contamination by other cell lines. In some cases, it may be necessary to maintain growing cultures of different cell lines in the same laboratory. During procedures in cell banking where open manipulations are performed, care should be taken to ensure that simultaneous open manipulations of other cell lines are avoided to prevent cross-contamination. Whenever another cell line was present in the cell banking room at the same time that open cell banking procedures were being performed (such as cell expansion, pooling, or aliquoting of the chosen cell line), the cell banks should be tested for the presence of cells from (or products derived from) the second cell line.

일반적으로 2.3.1항에 기술된 세포 확인 평가 방법은 다른 세포주에 의한 교차오염을 검출하는 시험으로도 적절한 것으로 본다. 세포기질로부터 의도한 제품을 성공적으로 제조함으로써 교차오염이 없다는 추가 보증을 얻을 수 있다.

In general, the methods described in Section 2.3.1 to assess cell identity are also considered adequate tests to detect cross-contamination by other cell lines. Additional assurance of lack of cross-contamination can be provided by successful preparation of the intended product from the cell substrate.

미생물 세포은행 내 외래성 미생물 인자 및 외래성 세포 오염물질에 대한 특이 시험의 설계와 수행에서는 은행화된 세포의 특성, 과학 문헌에 근거한 오염 가능성이 높은 오염물질, 유래원, 배양에 사용된 방법과 물질, 그리고 세포은행 제조 실험실에 있는 다른 생물체를 고려하여야 한다. 예를 들어, 일부는 세포기질의 증식을 지지하고 일부는 지지하지 않는 여러 미생물 배지를 사용하여, 잘 분리된 콜로니의 특성을 육안으로 관찰하는 것이 권장된다. 그러나 이러한 시험에서 생기는 세포기질의 내성 돌연변이체나 그 밖의 시험상 인공산물을 제조업자가 반드시 특성분석하도록 의도한 것은 아니다. 오히려 이러한 시험의 목적은 존재하는 오염물질을 검출하는 것이다.

The design and performance of specific tests for adventitious microbial agents and adventitious cellular contaminants in microbial cell banks should take into account the properties of the banked cell, the likely contaminants based upon scientific literature, source, methods and materials used for cultivation, and other organisms present in the banking laboratory. For example, visual examination of the characteristics of well-isolated colonies is suggested, using several microbiological media, of which some do and some do not support growth of the cell substrate. However, it is not intended that manufacturers necessarily characterise resistant mutants of the cell substrate arising from such studies, or other artifacts of such assays. Rather, the purpose of such assays is to detect existing contaminants.

세포 특성분석의 또 다른 측면은 생산에서의 의도한 용도에 대한 적합성이다. 세포기질 안정성에는 두 가지 관심사가 있다: 의도한 제품의 일관된 생산, 그리고 규정된 조건에서 보관하는 동안의 생산 능력 유지.

Another dimension to cell characterisation is appropriateness for intended use in production. There are two concerns for cell substrate stability: Consistent production of the intended product and retention of production capacity during storage under defined conditions.

생산을 위한 배양 중 안정성을 평가하기 위해서는 적어도 두 시점을 조사하여야 하며, 하나는 최소 횟수의 계대배양을 거친 세포를, 다른 하나는 품목허가 신청서에 기술된 생산용 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상의 세포를 사용한다. 생산용 생체외 세포연령 한계는 파일럿 플랜트 규모 또는 상업적 규모 조건에서 제안된 생산용 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상까지 확장한 생산 세포에서 얻은 자료에 근거하여야 한다. 일반적으로 생산 세포는 WCB의 세포를 확장하여 얻으며, 적절한 근거가 있으면 MCB의 세포를 사용할 수 있다. 이러한 세포기질 안정성 입증은 일반적으로 제품 품목허가 신청마다 1회 실시한다.

For the evaluation of stability during cultivation for production, at least two time points should be examined, one using cells which have received a minimal number of subcultivations, and another using cells at or beyond the limit of in vitro cell age for production use described in the marketing application. The limit of in vitro cell age for production use should be based on data derived from production cells expanded under pilot plant scale or commercial scale conditions to the proposed limit of in vitro cell age for production use or beyond. Generally, the production cells are obtained by expansion of cells from the WCB; cells from the MCB could be used with appropriate justification. This demonstration of cell substrate stability is commonly performed once for each product marketing application.

의도한 목적 제품의 일관된 생산과 관련한 세포기질 평가가 주된 관심 대상이어야 한다. 이러한 평가에 사용하는 시험의 종류와 시험 대상물은 세포기질의 특성, 배양 방법 및 제품에 따라 달라진다. 재조합 DNA 발현 구조체를 포함하는 세포주의 경우, 해당 ICH 가이드라인에 기술된 바와 같이 생산용 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상까지 배양한 세포에서 핵산 시험 또는 제품 분석으로 발현 구조체 암호화 서열의 일관성을 확인하여야 한다. 목적 제품의 암호화 서열이 이미 MCB 또는 WCB 수준에서 분석된 비재조합 세포주의 경우, 제안된 생산용 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상까지 배양한 생산 세포에서 핵산 시험 또는 정제된 단백질 제품의 분석으로 생산 중 단백질 암호화 서열의 불변성을 확인하여야 한다.

Evaluation of the cell substrate with respect to the consistent production of the intended product of interest should be the primary subject of concern. The type of testing and test article(s) used for such assessments will depend on the nature of the cell substrate, the cultivation methods, and the product. For cell lines containing recombinant DNA expression constructs, consistency of the coding sequence of the expression construct should be verified in cells cultivated to the limit of in vitro cell age for production use or beyond by either nucleic acid testing or product analysis, as described in the relevant ICH guideline. For non-recombinant cell lines in which the coding sequence for the desired product has already been analyzed at the MCB or WCB level, invariability of the protein coding sequence during production should be verified in the production cells cultivated to the proposed limit of in vitro cell age for production use or beyond by either nucleic acid testing or analysis of the purified protein product.

제품을 위와 같이 분석할 수 없는 경우에는, 예를 들어 형태학적 특성, 증식 특성, 생화학적 표지자, 면역학적 표지자, 목적 제품의 생산성 또는 그 밖의 관련 유전형·표현형 표지자를 포함할 수 있는 다른 특이 형질이 세포기질 안정성 평가에 유용할 수 있다. 경우에 따라 MCB의 특성을 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상의 생산 세포 특성과 직접 비교하기가 어렵거나 불가능하면, 생산 중 세포 안정성을 평가하기 위하여 배양 또는 생산 초기 단계 세포의 특성을 생산용 생체외 세포연령 한계 또는 그 이상의 세포 특성과 비교할 수 있다. 예를 들어 산소 또는 포도당 소비 속도, 암모니아 또는 젖산 생성 속도와 같은 지표가 이러한 시험에 유용할 수 있다.

Where the product cannot be analyzed as described above, other specific traits which may include, for example, morphological characteristics, growth characteristics, biochemical markers, immunological markers, productivity of the desired product, or other relevant genotypic or phenotypic markers may be useful for the assessment of cell substrate stability. In some cases, where direct comparison of the characteristics of the MCB with those of the production cells at or beyond the limit of in vitro cell age is difficult or impossible, one may compare the characteristics of cells at the initial stages of cultivation or production to those of cells at or beyond the limit of in vitro cell age for production use in order to assess cell stability during production. Indices such as, for example, oxygen or glucose consumption rates, ammonia or lactate production rates may be useful for such testing.

규정된 생산용 생체외 세포연령 한계를 늘리는 경우에는 제안된 새 생체외 세포연령 한계까지 확장한 세포의 자료로 뒷받침하여야 한다. 이배체 세포주의 경우, 제조에 사용하는 조건을 대표하는 조건에서 WCB 유래 세포의 유한한 생체외 수명을 입증하는 자료를 제시하여야 한다.

Increases in the defined limit of in vitro cell age for production use should be supported by data from cells which have been expanded to the proposed new limit of in vitro cell age. For diploid cell lines, data should be presented that establish the finite in vitro lifespan of the cells from the WCB under conditions representative of those employed for manufacturing use.

규정된 보관 조건에서 은행화된 세포의 안정성에 대한 근거는 대개 은행화된 세포로 임상시험용 물질을 생산하는 과정에서 얻어진다. 임상시험용 공급품 생산을 위해 보존 세포를 재구성할 때 측정한 세포 생존율 자료는 되살린 세포가 보존 과정에서 살아남았음을 확인해 준다. 임상시험용 물질 제조에서 얻은 자료는 되살린 세포를 목적 제품 제조에 사용할 수 있음을 입증한다. 이용 가능한 자료를 신청 자료에 명확히 문서화하고, 아울러 은행화된 세포의 안정성 모니터링 계획안을 제출하여야 한다. 제안된 모니터링은 적절히, 동결보존 세포은행 용기 하나 이상을 생산용으로 해동할 때, 제품 또는 생산 일관성을 관련 방식으로 모니터링할 때, 또는 새 WCB 제조를 위해 동결보존 MCB 용기 하나 이상을 해동할 때(그리고 새 WCB가 적절히 적격성 평가될 때) 수행할 수 있다.

Evidence for banked cell stability under defined storage conditions will usually be generated during production of clinical trial material from the banked cells. Data from the determination of cell viability when the preserved cells are reconstituted for production of clinical trial supplies will verify that the revived cells have survived the preservation process. Data from the preparation of clinical materials will demonstrate that the revived cells can be used to prepare the desired product. Available data should be clearly documented in the application dossiers, plus a proposal for monitoring of banked cell stability should be provided. The proposed monitoring can be performed at the time that one or more containers of the cryopreserved bank is thawed for production use, when the product or production consistency is monitored in a relevant way, or when one or more containers of the cryopreserved MCB is thawed for preparation of a new WCB (and the new WCB is properly qualified), as appropriate.

장기간 생산이 이루어지지 않는 경우에는, 생산 기질의 원천으로 사용하는 세포은행에 대해 품목허가 신청서에 기술한 주기로 생존율 시험을 실시하여야 한다. 세포기질의 생존율이 유의하게 감소하지 않았다면, 일반적으로 MCB 또는 WCB에 대한 추가 시험은 필요하지 않은 것으로 본다.

In the case when production does not take place for a long period of time, viability testing on the cell bank used as a source of the production substrate should be performed at an interval described in the marketing application. If the viability of the cell substrate is not significantly decreased, generally no further testing of the MCB or WCB is considered necessary.

이배체 세포주의 안전성 평가 또는 새로운 세포주의 특성분석에 핵형분석 및 종양원성 시험을 활용하는 것은 세포, 제품의 특성 및 제조공정에 따라 유용할 수 있다. 이수체 세포의 상대적 비율을 결정하기 위한 광범위한 분석은 유용하지 않은 것으로 밝혀졌다. 설치류 세포주 또는 비이배체로 알려진 새로운 세포주에 대해서는 핵형을 결정할 필요가 없다. 그러나 세포유전학적 분석은 2.3.1항과 2.3.2항에 기술한 바와 같이 세포기질의 확인 또는 순도를 평가하는 적절한 방법이 될 수 있다. 종양원성에 대한 근거가 이미 문서화된 세포에 대해서는 종양원성 시험을 반복할 필요가 없는 것으로 본다.

Utilisation of karyology and tumorigenicity testing for evaluating the safety of a diploid cell line or characterizing a new cell line may be useful depending on the cells, the nature of the product and the manufacturing process. Extensive analysis to determine the relative abundance of aneuploid cells has not been found to be useful. Karyology need not be determined for rodent cell lines or new cell lines known to be non-diploid. However, cytogenetic analysis may be an adequate method to assess cell substrate identity or purity as described in Sections 2.3.1 and 2.3.2. Repetition of tumorigenicity testing for cells with already documented evidence of tumorigenicity is not considered necessary.

고도로 정제되고 세포를 포함하지 않는 제품의 경우, 공정 밸리데이션 연구 또는 로트 출하 시험을 통해 잔류 숙주세포 DNA에 대한 적절한 한도를 일관되게 충족함이 입증된다면, 핵형분석 및 종양원성 시험은 일반적으로 필요하지 않은 것으로 본다.

For products that are highly purified and that contain no cells, karyology and tumorigenicity testing are generally not considered necessary, provided that appropriate limits for residual host cell DNA are shown to be consistently met by either process validation studies or by lot release testing.

일반적으로 살아 있는 세포의 존재를 배제할 수 없거나 하류 정제가 거의 없는 제품(예: 일부 전통적인 생바이러스 백신)은 세포기질에 대한 이러한 특성분석이 필요하다. 정제되지 않은 제품에 사용하는 새로운 세포기질에 대한 종양원성 시험 및 염색체 분석의 유용성은 사례별로 평가하여야 한다. 제품이 세포를 포함하거나 고도로 정제되지 않은 경우, 종양원성이 있거나 비정상 핵형을 지닌 것으로 알려진 세포주의 사용은 각 제품 신청마다 위험-유익성 측면에서 평가하여야 한다.

In general, products for which the presence of live cells cannot be excluded or which have little downstream purification (for example, some conventional live virus vaccines) will need such characterization of the cell substrate. The utility of tumorigenicity testing and chromosomal analysis for new cell substrates for unpurified products should be evaluated on a case-by-case basis. Use of cell lines known to be tumorigenic or to possess abnormal karyology should be evaluated in terms of risk-benefit for each product application when the product contains cells or when not highly purified.

유전적으로 변형되지 않은 MRC-5 또는 WI-38 세포로 제조하는 제품은, 이들 세포주에 대해 이미 광범위한 특성분석이 수행되어 공표되었으므로, 이들 세포기질에 대한 핵형분석이나 종양원성 특성분석이 필요하지 않다. 그러나 생성하는 각 MRC-5 및 WI-38 WCB에 대해, 제조업자는 생산에 사용할 방식으로 증식시킨 세포가 이배체이며 예상 수명을 지니는지를 1회 확인하여야 한다.

Products that are manufactured in genetically unmodified MRC-5 or WI-38 cells do not need characterization of these cell substrates by karyology or tumorigenicity since extensive characterization has already been performed and published for these cell lines. However, for each MRC-5 and WI-38 WCB generated, manufacturers should confirm, once, that the cells grown in the manner to be used in production are diploid and have the expected lifespan.

새로운 또는 이전에 특성분석되지 않은 이배체 세포기질의 경우, MCB의 세포를 사용하여 이배체 핵형의 확인 결과를 제시하고 종양원성 잠재력을 규명하여야 한다. 핵형분석 및 종양원성 분석 방법은 WHO 문서 "WHO.Requirements for Use of Animal Cells as in vitro Substrates for the Production of Biologicals"(WHO Expert Committee on Biological Standardization, 47th Report, Geneva, World Health Organization(WHO Technical Report Series, 인쇄 중))에서 찾을 수 있다.

For new or previously uncharacterized diploid cell substrates, confirmation of diploid karyology should be presented and tumorigenic potential should be established, using cells from the MCB. Methods for karyological and tumorigenicity analysis may be found in the WHO document “WHO.Requirements for Use of Animal Cells as in vitro Substrates for the Production of Biologicals” in WHO Expert Committee on Biological Standardization, 47th Report, Geneva, World Health Organization (WHO Technical Report Series, in press).

이 문서에 담긴 원칙은 일반적으로 특성분석된 은행화 세포로 제조하는 생명공학의약품/생물의약품에 적용된다. 그러나 다수의 생물의약품, 특히 일부 바이러스 백신은 일차 세포를 사용하여 제조된다.

The principles contained in this document apply in general to biotechnological/biological products prepared from characterized banked cells. However, a number of biological products, in particular certain viral vaccines, are prepared using primary cells.

일차 세포배양은 기원 조직으로부터 확립한 후 첫 계대 이내에 사용되므로, 은행화된 세포기질에서와 같이 사용 전에 세포를 광범위하게 특성분석하는 것은 불가능하다. 또한 일차 세포기질을 사용하여 생산한 생물의약품은 광범위한 공정(예: 정제)을 거치지 않는 경우가 많다. 이러한 차이에도 불구하고, 생물의약품 생산용 일차 세포기질의 적합성과 안전성을 보증하기 위한 접근법은 여러 측면에서 이 문서 및 다른 가이드라인에 제시된 접근법과 유사하다.

Because primary cell cultures are used within the first passage after establishment from the tissue of origin, it is not possible to carry out extensive characterization of the cells prior to their use as is done for banked cell substrates. In addition, biological products produced using primary cell substrates often do not undergo extensive processing (e.g., purification). Despite these differences, the approach taken to assure the suitability and safety of primary cell substrates for production of biologicals is analogous, in many respects, to that outlined in this document and in other guidelines.

이 부록은 일차 세포를 사용하여 제조한 생물의약품의 품목허가 신청서에 포함하여야 하는 세포기질 관련 정보를 개략적으로 제시한다. 이 정보는 일반적으로 세 범주로 나뉜다: (1) 일차 세포기질 확립에 사용하는 유래 조직(또는 장기) 및 그 밖의 동물 유래 원료에 관한 정보, (2) 일차 세포기질의 제조에 관한 정보, (3) 제품의 안전성을 보증하기 위하여 일차 세포기질에 대해 실시한 시험.

This Annex outlines cell substrate-related information that should be included in marketing applications for biological products prepared using primary cells. This information falls into three general categories: (1) Information concerning the source tissue (or organ) and other animal-derived raw materials used for the establishment of primary cell substrates, (2) information concerning the preparation of primary cell substrates, and (3) testing performed on primary cell substrates to ensure the safety of the product.

일차 세포기질 제조를 위한 조직의 유래원으로 사용하는 동물에 관한 정보를 제공하여야 한다. 조직은 병원체가 없음을 증명하기 위해 수의학적 모니터링과 실험실 모니터링을 거친 건강한 동물에서 유래하여야 한다. 가능한 경우, 공여 동물은 폐쇄된 특정 병원체 부재(가능한 경우) 군집 또는 무리에서 확보하여야 한다. 조직 공여 동물로 사용하는 동물은 이전에 실험 연구에 사용된 적이 없어야 한다. 동물은 세포 제조에 사용하기 전에 적절한 기간 동안 충분히 검역하여야 한다. 일부 국가에서는 일차 세포를 제조하는 국가에서 동물을 검역하여야 할 수 있다. 제조업자는 구체적인 요구사항에 대해 국가/지역 당국과 협의하여야 한다.

Information should be provided about the animals used as a source of tissue for the preparation of primary cell substrates. Tissue should be derived from healthy animals subjected to veterinary and laboratory monitoring to certify the absence of pathogenic agents. Whenever possible, donor animals should be obtained from closed, specific pathogen-free (when available) colonies or flocks. Animals used as tissue donors should not have been used previously for experimental studies. Animals should be adequately quarantined for an appropriate period of time prior to use for the preparation of cells. In some countries, animals may need to be quarantined in the country where the primary cells are prepared. Manufacturers should consult with national/regional authorities for specific requirements.

일차 세포기질 제조에 사용하는 물질 및 성분에 관한 정보를 제공하여야 하며, 여기에는 사람 또는 동물 유래 시약 모두의 확인 정보와 유래원이 포함된다. 검출 가능한 오염물질과 외래성 인자가 없음을 증명하기 위해 동물 유래 성분에 대해 실시한 시험에 관한 기술을 포함하여야 한다.

Information on materials and components used for the preparation of primary cell substrates should be provided, including the identity and source of all reagents of human or animal origin. A description of testing performed on components of animal origin to certify the absence of detectable contaminants and adventitious agents should be included.

조직으로부터의 세포 분리, 일차 세포배양의 확립 및 배양 유지에 사용하는 방법을 기술하여야 한다.

Methods used for isolation of cells from tissue, establishment of primary cell cultures and maintenance of cultures should be described.

일차 세포기질을 생산에 사용하기 위한 적격성 평가로서 실시한 시험을 기술하여야 한다. 앞서 언급한 바와 같이, 일차 세포기질의 특성상 사용 전 광범위한 시험과 특성분석은 불가능하다. 따라서 이들 기질에 외래성 인자가 없음을 입증하기 위한 시험은 동시에 실시하며, 다음이 포함될 수 있다: 생산 기간 전, 중, 후에 걸친 생산 배양 또는 비감염 대조 배양의 관찰; 생산 배양 및 비감염 대조 배양의 배양액을 광범위한 관련 바이러스를 검출할 수 있는 여러 감수성 지시세포 배양에 접종한 후 세포병변 변화를 관찰하고 혈구흡착 바이러스의 존재를 시험하는 것; 그리고 필요한 경우 특정 인자(예: 관련 레트로바이러스)에 대한 그 밖의 시험. 특정 바이러스 시험에 관한 추가 정보는 관련 국가/지역/국제 가이드라인에서 찾을 수 있다.

Tests performed on primary cell substrates to qualify them for use in production should be described. As noted, the nature of primary cell substrates precludes extensive testing and characterization prior to use. Testing to demonstrate the absence of adventitious agents in these substrates is therefore conducted concurrently and may include: Observation of production or uninfected control cultures before, during, and beyond the period of production; inoculation of culture fluids from production and uninfected control cultures into various susceptible indicator cell cultures capable of detecting a wide range of relevant viruses, followed by examination for cytopathic changes and testing for the presence of hemadsorbing viruses; and other tests for specific agents (such as relevant retroviruses) as necessary. Additional information concerning specific viral tests may be found in the relevant national/regional/international guidelines.

특정 제품의 생산에 사용하는 세포에 대한 적절한 시험 체계와 시험 방법은 조직의 유래원으로 사용한 공여 종, 존재 가능성이 있는 외래성 인자, 제품의 특성, 의도한 임상적 용도, 제조공정의 측면, 그리고 최종 제품에 대해 실시한 시험의 범위에 따라 달라진다. 신청자는 자사의 특정 제품과 관련하여 채택한 접근법을 설명하고 그 타당성을 입증하여야 한다.

Appropriate testing regimens and test methods for cells used in the production of specific products will vary depending on the donor species used as a source of tissue, adventitious agents potentially present, the nature of the product, its intended clinical use, aspects of the manufacturing process, and the extent of testing performed on the final product. Applicants should explain and justify the approach taken with respect to their specific product.