이 가이던스는 이 주제에 관한 FDA의 현재 견해를 나타낸다. 이 가이던스는 누구에게도 어떠한 권리를 설정하지 않으며 FDA 또는 일반 대중을 구속하지 않는다. 적용되는 법률 및 규정의 요건을 충족한다면 다른 접근 방법을 사용할 수 있다. 다른 접근 방법을 논의하려면 표지에 기재된 이 가이던스 담당 FDA 직원에게 문의한다.

This guidance represents the current thinking of the Food and Drug Administration (FDA or Agency) on this topic. It does not establish any rights for any person and is not binding on FDA or the public. You can use an alternative approach if it satisfies the requirements of the applicable statutes and regulations. To discuss an alternative approach, contact the FDA staff responsible for this guidance as listed on the title page.

이 가이던스는 미국약전(USP) 제<85>장 “세균 엔도톡신 시험(Bacterial Endotoxins Test)”,² USP 제<161>장 “의료기기 ‒ 세균 엔도톡신 및 발열성물질 시험(Medical Devices ‒ Bacterial Endotoxin and Pyrogen Tests)”,³ 그리고 의료기기진흥협회(Association for the Advancement of Medical Instrumentation, AAMI) ST72:2002/R2010 세균 엔도톡신—시험 방법, 일상 모니터링 및 배치 시험의 대안(Bacterial Endotoxins—Test Methodologies, Routine Monitoring, and Alternatives to Batch Testing, AAMI ST72)^{4, 5}의 시험 권고사항과 허용기준에 관한 FDA의 현재 견해를 생물의약품, 의약품 및 의료기기 업체에 권고사항으로 제공한다.

This guidance provides recommendations for biological product, drug, and device firms on FDA’s current thinking concerning the testing recommendations and acceptance criteria in the United States Pharmacopeia (USP) Chapter <85> “Bacterial Endotoxins Test”,² USP Chapter <161> “Medical Devices ‒ Bacterial Endotoxin and Pyrogen Tests”,³ and the Association for the Advancement of Medical Instrumentation (AAMI) ST72:2002/R2010, Bacterial Endotoxins—Test Methodologies, Routine Monitoring, and Alternatives to Batch Testing (AAMI ST72).^{4, 5}

이 세 문서는 겔화법(gel clot), 비색법(photometric) 및 카이네틱법(kinetic) 시험 방법의 기본 원리를 기술하고, 해당 구성 성분과 완제품에 대해 발열성물질과 엔도톡신의 존재 여부를 시험하도록 권고한다.

These three documents describe the fundamental principles of the gel clot, photometric, and kinetic test methods, and recommend that appropriate components and finished products be tested for the presence of pyrogens and endotoxins.

이 가이던스는 발열성물질 및 엔도톡신 시험의 주제 전체를 다루지 않는다. 대신 잘못 해석될 수 있으면서 공정서 시험법이나 현재 이용 가능한 가이던스 문서에서 다루지 않는 사항을 다룬다. 이 가이던스를 사용할 때에는 이들 문서를 이미 충분히 이해하고 있어야 한다.

This guidance does not cover the entire subject of pyrogen and endotoxins testing. Instead, it addresses those issues that may be subject to misinterpretation and are not covered in compendial procedures or in currently available guidance documents. You should already have a thorough understanding of these documents when using this guidance.

이 가이던스를 포함한 FDA의 가이던스 문서는 법적 구속력이 있는 책임을 설정하지 않는다. 가이던스는 특정 규정 또는 법률 요건이 인용된 경우가 아니면 어떤 주제에 관한 FDA의 현재 견해를 기술한 것이며 권고사항으로만 보아야 한다. FDA 가이던스에서 should라는 단어는 어떤 것이 제안되거나 권장된다는 뜻이며, 요구된다는 뜻은 아니다.

FDA’s guidance documents, including this guidance, do not establish legally enforceable responsibilities. Instead, guidances describe the Agency’s current thinking on a topic and should be viewed only as recommendations, unless specific regulatory or statutory requirements are cited. The use of the word should in Agency guidances means that something is suggested or recommended, but not required.

FDA는 30년 넘게 토끼 발열성물질 시험 대신 엔도톡신에 대한 투구게 아메보사이트 용해물(Limulus Amoebocyte Lysate, LAL) 시험의 사용을 인정해 왔다. FDA는 1977년 11월 4일 연방관보(Federal Register) 공고(42 FR 57749)에서 LAL을 완제품 시험으로 사용하기 위한 조건을 기술하였다.⁶ 1983년에 이르러 FDA는 가이던스에서 LAL 시험을 엔도톡신에 대한 완제품 시험으로 사용할 수 있다고 밝혔다. 이 시험들은 일련의 가이던스 초안 및 최종 가이던스 문서에 기술되었다.

For more than 30 years, FDA has accepted the use of a Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) test for endotoxins in lieu of the rabbit pyrogens test. In a November 4, 1977, Federal Register notice (42 FR 57749), FDA described conditions for using LAL as a finished product test.⁶ By 1983, FDA indicated in guidance that an LAL test could be used as a finished product test for endotoxins. These tests were described in a series of draft and final guidance documents.

사람 및 동물용 주사제, 생물의약품 및 의료기기의 최종제품 엔도톡신 시험으로서 투구게 아메보사이트 용해물 시험의 밸리데이션에 관한 가이드라인(Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test for Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products, and Medical Devices)이 1987년에 발행되었고(1987 가이던스), 이 가이던스의 제1판은 2012년에 발행되었다.

Guideline on Validation of the Limulus Amebocyte Lysate Test as an End-Product Endotoxin Test for Human and Animal Parenteral Drugs, Biological Products, and Medical Devices, was published in 1987 (the 1987 Guidance) and Version 1 of this Guidance was published in 2012.

FDA는 발열성물질 및 엔도톡신 시험 한도의 방법과 계산을 기술한 USP 및 AAMI 공개 문서⁷가 업계에 적절한 정보를 제공한다고 판단하였다. FDA는 1987 가이던스가 이 주제에 관한 FDA의 현재 견해를 더 이상 반영하지 않으므로 이를 폐지하였다. 그러나 공정서의 각 장과 표준이 일부 규제적 관점을 다루지 않으므로, FDA는 FDA 규제 대상 제품에 대한 발열성물질 및 엔도톡신 시험의 제출과 유지에 관한 현재 견해를 설명하기 위해 이 가이던스에서 보충 정보를 제공한다.

FDA has found that the published USP and AAMI documents describing methods and calculation of pyrogen and endotoxins testing limits⁷ provide industry with appropriate information. The Agency has withdrawn the 1987 Guidance because it no longer reflects the Agency’s current thinking on the topic. However, because the compendial chapters and standards do not address certain regulatory perspectives, FDA is providing supplemental information in this guidance to explain our current thinking regarding the submission and maintenance of pyrogen and endotoxins testing for FDA-regulated products.

완제의약품에 대한 CGMP(현행 우수 의약품 제조 및 품질관리 기준) 규정은 과학적으로 타당하고 적절한 검체 채취를 요구하며,⁸ 의료기기 품질경영시스템 규정은 적절한 경우 통계적 기법을 사용하고 검체 수의 근거를 갖춘 밸리데이션을 요구한다.⁹ 검체 채취 정보는 AAMI ST72에서는 다루지만 USP 제<85>장에서는 다루지 않는다. 업체는 검체 채취를 허가신청 자료의 일부로 포함하여야 한다. 검체를 채취할 때 업체는 원자재, 공정 중 물질 및 완제품의 오염 가능성을 고려하여야 한다. 구체적으로 업체는 제조 공정의 일관성, 공정 중 보관 시간의 영향, 엔도톡신 제거 단계, 완제품 엔도톡신 기준 등 제조 설계의 여러 측면을 고려하여야 한다.

The current good manufacturing practice (CGMP) regulations for finished pharmaceuticals require scientifically sound and appropriate sampling⁸ and the medical device quality management system regulation requires validation using statistical techniques, as appropriate, with rationale for sample sizes.⁹ Sampling information is addressed in AAMI ST72, but not USP Chapter <85>. Firms should include sampling as part of their application documentation. When sampling, firms should consider the potential for contamination in raw materials, in-process materials, and the finished product. Specifically, firms should take into account aspects of the manufacturing design, including consistency of a manufacturing process, impact of in-process hold times, endotoxins removal steps, and finished product endotoxins specifications.

검체 채취는 고정된 것이 아니라 변할 수 있는 것으로 보아야 한다. 업체는 최대 범위로 시작하여 제조 공정에서 엔도톡신 방지에 대한 확신이 쌓이는 대로 절차를 조정하여야 한다. 업체는 절차를 조정할 때 규제 제출 자료를 갱신하여야 한다. 의약품과 생물의약품의 경우 이러한 공정 중 변경은 적절히 변경신청(supplement) 또는 연차 보고로 제출하여야 한다.¹⁰ 의료기기의 경우 30일 통지(30-day notice)¹¹가 적절할 수 있다.¹²

Sampling should be considered dynamic; firms should begin with maximum coverage and adjust their procedures as they gain confidence in the prevention of endotoxins in their manufacturing processes. Firms should update their regulatory filings when adjusting procedures. For drugs and biological products, these in-process changes should be submitted in a supplement or annual report, as appropriate.¹⁰ For devices, a 30-day notice¹¹ may be appropriate.¹²

한 시험 회차 안에서 상충하는 결과가 나오면 업체는 반복 시험에 관한 안내를 얻기 위해 USP 제<85>장의 겔화 한도시험(Gel-Clot Limit Test) 중 판정(Interpretation)을 참고하여야 한다. 제<85>장에 규정된 대로, 최대 유효 희석배수(maximum valid dilution, MVD)보다 낮은 희석에서 시험이 부적합이었다면 MVD를 넘지 않는 더 높은 희석으로 시험을 반복하여야 한다. 이 부적합 기록은 시험 결과에 포함하여야 한다. MVD에서 시험을 수행하여 시험 오류로 돌릴 수 없는 기준일탈(OOS) 시험 결과가 나오면 해당 로트는 부적합 처리하여야 한다.¹³

When conflicting results occur within a test run, firms should consult USP Chapter <85>, Gel-Clot Limit Test, Interpretation, for guidance on repeat testing. As specified in Chapter <85>, if the test failure occurred at less than the maximum valid dilution (MVD), the test should be repeated using a greater dilution not exceeding the MVD. A record of this failure should be included in the laboratory results. If a test is performed at the MVD and an out-of-specification (OOS) test result occurs that cannot be attributed to testing error, the lot should be rejected.¹³

위 한도 내의 재시험 절차를 포함한 모든 시험 절차는 업체의 품질관리 부서가 승인한 표준작업지침서에 사전에 규정하여야 한다.

All testing procedures, including those for retesting within the above limits, should be specified in advance in written standard operating procedures approved by the firm’s quality control unit.

그렇다. 엔도톡신 검출 능력은 보관과 취급의 영향을 받을 수 있다. 업체는 측정 가능한 엔도톡신 함량의 안정성을 입증하는 시험 데이터를 이용하여 세균 엔도톡신 분석용 검체의 보관 및 취급(제품 혼합 포함) 절차를 수립하여야 한다. 계획서는 정제된 세균 엔도톡신이 천연 엔도톡신 공급원과 다르게 반응할 수 있음을 염두에 두고 시험에 사용한 엔도톡신의 공급원을 고려하여야 한다.

Yes. The ability to detect endotoxins can be affected by storage and handling. Firms should establish procedures for storing and handling (which includes product mixing) samples for bacterial endotoxins analysis using laboratory data that demonstrate the stability of assayable endotoxins content. Protocols should consider the source of endotoxins used in the study, bearing in mind that purified bacterial endotoxins might react differently from native sources of endotoxins.

그렇다. 일부 예외(아래 참조)를 제외하고, 완제의약품 단위를 합쳐 혼합 검체로 만들어 세균 엔도톡신을 측정할 수 있다. 혼합 검체는 수성 의약품 한 제조 로트의 완제품 용기에서 단위 전체 또는 일부 분취액(같은 부피)으로 구성할 수 있다. 유해한 수준의 엔도톡신을 함유한 단위가 엔도톡신 수준이 낮아 덜 유해한 다른 단위와 섞여 희석될 가능성이 있으므로, MVD를 그에 비례하여 더 낮은 값으로 조정한다면 소용량 주사제(부피 100 mL 이하)에 대해서는 검체를 합치는 것이 일반적으로 인정된다. 이 “조정 MVD”는 개별 검체에 대해 계산한 MVD를 합칠 검체의 총 개수로 나누어 구한다. FDA는 처음, 중간, 마지막 완제품 용기를 대표하여 시험한다는 개념에 맞추어 혼합 검체 하나에 세 단위 이하를 합치도록 제안한다.

Yes. With some exceptions (see below), finished drug product units may be pooled into a composite sample and assayed for bacterial endotoxins. The composite sample may be represented by the entire unit or partial aliquots (equal volumes) of finished product containers from one manufactured lot of aqueous-based pharmaceuticals. Pooling would generally be accepted for small-volume parenterals (those with volumes of 100 mL or less) as long as the MVD is adjusted to a proportional, lower value because of the potential for diluting a unit containing harmful levels of endotoxins with other units containing lower, less harmful, levels of endotoxins. This “adjusted MVD” is obtained by dividing the MVD computed for an individual sample by the total number of samples to be pooled. FDA suggests pooling no more than three units per composite in keeping with the concept of testing representative beginning, middle, and end finished product containers.

MVD를 이렇게 낮춘 결과 희석이 불충분하여 제품 관련 분석 간섭을 극복할 수 없다면 검체를 개별적으로 시험하여야 한다.

If this reduction in MVD results in an inability to overcome product-related assay interference because of an insufficient dilution, then the samples should be tested individually.

완제 의료기기도 합쳐 혼합 검체로 만들어 세균 엔도톡신을 측정할 수 있다. 의료기기 시험은 저해/촉진 시험에도 쓰이는 ISO 10993-1¹⁴ 및 ISO 10993-12¹⁵에 기술된 세척/용출 및 검체 채취 기법을 사용하여 수행하여야 한다. 특수한 상황에서는 검체 채취를 조정할 수 있다. 완제 생산 로트에서 적절한 용출액/추출액 혼합물을 얻은 후에는, 이 혼합 추출액을 중복(duplicate) 시험할 때까지 안정성에 적절한 조건에서 보관하여야 한다.

Finished medical devices may also be pooled into a composite sample and assayed for bacterial endotoxins. Testing for medical devices should be conducted using rinsing/eluting and sampling techniques as described in ISO 10993-1¹⁴ and ISO 10993- 12,¹⁵ as also used for inhibition/enhancement. Sampling can be adjusted for special situations. After a suitable eluate/extract pool is obtained from a finished production lot, this pooled extract should be kept under conditions appropriate for stability until it is tested in duplicate.

FDA는 혼합 검체를 각 제품 용기에서 (최소 30초간 세게 혼합한 후) 무균적으로 취한 분취액의 혼합물로 만들 것을 권고한다.¹⁶ 이렇게 하면 혼합 검체에서 OOS 결과가 나올 경우 재시험에 원래의 개별 용기를 사용할 수 있다.

FDA recommends that pooled samples be a composite of aseptically removed aliquots (after at least 30 seconds of vigorous mixing) from each of the product containers.¹⁶ In this way, the original, individual containers will be available for possible retesting in the event the pooled sample displays an OOS result.

일부 제품 유형은 검체를 합치지 않아야 한다. 두 가지 예로, 초기 MVD가 낮은 의약품(위의 “조정 MVD” 논의 참조)과 현탁액으로 제조되는 제품이 있는데, 후자는 검체 분취액의 균질성이 심각한 간섭 문제를 일으킬 수 있기 때문이다. FDA는 또한 제조 공정의 서로 다른 공정 중 단계에서 채취한 공정 중 검체를 합치는 것도 권고하지 않는데, 이러한 물질의 균질성을 보장하기 어려울 수 있기 때문이다.

Some product types should not be pooled. Two examples are drug products that have an initial low MVD (see discussion above of “adjusted MVD”) and products that are manufactured as a suspension, because sample aliquot homogeneity may present significant interference issues. FDA also does not recommend pooling in-process samples from different in-process stages of the manufacturing process because it may be difficult to ensure the homogeneity of these materials.

그렇다. 정확성, 감도, 정밀성, 선택성, 또는 자동화나 컴퓨터 데이터 처리에 대한 적합성 측면에서 이점이 있거나 그 밖의 특수한 상황에서는 업체가 대체 방법 및/또는 절차를 사용할 수 있다. 이러한 대체 절차와 방법은 USP 일반 제<1225>장 “공정서 시험법의 밸리데이션(Validation of Compendial Procedures)”^{17, 18}에 기술된 대로 밸리데이션하여야 하며, 동등하거나 더 나은 결과를 얻는다는 것을 보여야 한다.¹⁹ 차이가 나타나거나 분쟁이 생기면, 시험 대상 제품의 각조에 달리 규정되어 있지 않는 한 USP 공정서 겔화법을 근거로 최종 판정한다.²⁰

Yes, firms may use alternative methods and/or procedures if they provide advantages in terms of accuracy, sensitivity, precision, selectivity, or adaptability to automation or computerized data reduction, and in other special circumstances. Such alternative procedures and methods should be validated as described in the USP General Chapter <1225>, “Validation of Compendial Procedures”,^{17, 18} and should be shown to achieve equivalent or better results.¹⁹ When a difference appears or in the event of a dispute, the final decision is made based upon the USP compendial gel-clot method unless otherwise indicated in the monograph for the product being tested.²⁰

다음은 대체 시험법의 예이다.

Below is an example of an alternative assay.

특정 시험 물질이나 재료가 단핵구 활성화 방법으로 평가하기에 적절한지 확인하려면 제품별 밸리데이션이 필요하다. 밸리데이션에는 간섭 시험, 개별 시험 검체에서 발열성물질의 정확한 검출, 그리고 의료기기의 경우 시험계가 단핵구와 직접 접촉할 수 있는지가 포함되어야 하며, 이에 국한되지 않는다.

Product-specific validation is necessary to establish whether a particular test substance or material is appropriate for evaluation of the monocyte activation method. The validation should include, but is not limited to, interference testing, accurate detection of pyrogen in individual test samples, and, for devices, ability of test system to provide direct contact to the monocytes.

같은 대상을 측정하는 시험 간의 전환은 두 시험을 비교하여 새 방법의 동등성을 확인함으로써 할 수 있다.²¹ 검출한계와 저해/촉진의 비교가 기본이다. 새 방법의 감도는 엔도톡신을 첨가한(spiked) 제품 검체로 평가할 수 있다.²² 첨가 검체를 사용하는 것 외에도, 양성으로 확인된 제품의 현장 검체 여러 개는 두 방법의 결과를 비교하는 좋은 자료가 될 수 있다. 방법 밸리데이션에서는 방법의 일상적 사용과 제조 환경에서 나타나는 변동성(예: 원료 물질 또는 계절 변화)도 다루도록 하여야 한다.²³

The transition between tests that measure the same entity can be made by comparing the two tests to verify the equivalence of the new method.²¹ The comparison of the limit of detection and inhibition/enhancement is fundamental. The sensitivity of the new method can be evaluated on spiked product samples.²² In addition to using spiked samples, a battery of field samples of product found to be positive may be a good source for comparing results from the methods. The method validation should also attempt to address the variability found in the normal use of the method and the manufacturing environment (e.g., source materials or seasonal changes).²³

의약품, 동물용 의약품 및 생물의약품의 경우 새 방법으로의 전환은 사전승인 변경신청(PAS)으로 제출하여야 한다. 또는 업체가 시험 간 전환을 위한 일반적인 방법을 확립했다면, 그 방법을 PAS—동등성 평가 계획서(comparability protocol, CP)로 제출하여 심사받을 수 있다. CP에는 시험법 간 전환에 사용하는 방법과 새 방법의 동등성을 입증하는 데 사용하는 허용기준을 상세히 기술하여야 한다. CP가 승인된 후에는 CP 시행 결과를 더 낮은 보고 범주로 보고할 수 있다(21 CFR 314.81, 314.98 및 601.12). 업체는 FDA 검토를 위해 시험 계획서, 최종 보고서 및 모든 데이터를 시설에 보관하여야 한다. 업체는 CP를 제출하기 전에 해당 심사 부서와 제출 절차를 확인하여야 한다.

For drug, animal drug, and biological products, the transition to a new method should be submitted in a prior approval supplement (PAS). Alternatively, once a firm has established a general method for making the transition between tests, it may submit the method for review in a PAS—comparability protocol (CP). The CP should describe, in detail, the methods used to transition between assays and the acceptance criteria used to establish the equivalence of the new method. After approval of the CP, results of implementation of the CP may be reported in a reduced reporting category (21 CFR 314.81, 314.98, and 601.12). The firm should maintain the study protocol, final report, and all data at the facility for FDA review. The firm should confirm the filing process with the appropriate review division before submitting a CP.

3등급(Class III) 의료기기의 경우 새 시험법으로의 전환은 21 CFR 814.39(f)에 따라 제출하는 30일 통지에 적합할 수 있다.²⁴ 1등급 및 2등급(Class I and II) 의료기기의 제조 변경은 ISO 13485:2016을 인용으로 포함하는 품질경영시스템 규정 21 CFR 820에 따라야 한다. 설계 관리, 생산 및 공정 관리 요건은 7.3항과 7.5항을 포함한 ISO 13485:2016 7항에서 찾을 수 있다.

For Class III devices, the transition to a new assay may be appropriate for a 30-day notice filed under 21 CFR 814.39(f).²⁴ Manufacturing changes for Class I and II devices must be in accordance with the quality management system regulation, 21 CFR part 820, which incorporates ISO 13485:2016 by reference. Design control, production and process control requirements can be found at ISO 13485:2016 Clause 7, including subclauses 7.3 and 7.5.

의료기기의 경우, 멸균 전 비멸균 검체로 최종제품 발열성물질 시험을 수행하는 것을 포함하여 입고 구성품, 원자재, 공정 중 기기 또는 완제 기기에 사용하는 품질관리 시험의 변경에는 30일 통지가 적절할 수 있다.²⁵ 의료기기 제조업자는 해당 기기의 투여 경로와 신체 접촉 유형에 부합하는 감도를 입증하여야 한다. 제조업자는 방법 간 및 USP 표준품과의 재현 가능한 상관관계를 입증한 후 다른 엔도톡신 시험을 사용할 수 있다.

For devices, a 30-day notice may be appropriate for changes to quality control testing used on incoming components, raw materials, the in-process device, or the finished device, including performing end-product pyrogen testing on nonsterile samples prior to sterilization.²⁵ Manufactures of medical devices should demonstrate a sensitivity that is consistent with the route of administration for the device and the type of body contact. Manufacturers may be able to use another endotoxin test after demonstrating a reproducible correlation between methods and the USP reference standard.

1987 가이던스 발행 이후 투여(용법) 및 의약품 함량의 수가 늘어났기 때문에 엔도톡신 한도표는 더 이상 현재 상황에 맞지 않는다. 엔도톡신 한도를 정하는 적절한 방법은 USP 또는 AAMI 표준에 제시된 계산 방법을 사용하는 것이다. 각조의 한도 또한 현재의 제품 함량이나 용법을 반영하지 못할 수 있으므로, 이 한도도 표준에서 권고하는 계산으로 확인하여야 한다.

The endotoxins limit table is out of date due to the increase in numbers of dosage (regimes) and drug strengths since the publication of the 1987 Guidance. The appropriate way to establish the endotoxins limit is to use the calculation methods provided in the USP or AAMI standards. Monograph limits may also not account for current product strengths or dosage regimes; these should also be checked using the calculations recommended in the standards.

완제품에 여러 구성 성분이 있는 경우, 개별 구성 성분의 엔도톡신 한도와 관계없이 비경구 투여 제품의 전체 엔도톡신 한도는 USP <85> “세균 엔도톡신 시험”에 규정된 전체 역치 한도를 넘지 않아야 한다. 척수강내 투여 제품, 안과용 제품 또는 의료기기(의료기기는 질문 11 참조)는 비경구 투여 제품에 대한 계산에 근거하지 않은 엔도톡신 한도를 가질 수 있다. FDA는 업체가 이러한 제품에 대해 해당 부서나 심사 부서에 확인하도록 권장한다.

If there are several components in a finished product, then the overall endotoxins limit for parenterally-administered products should not exceed the overall threshold limit specified in the USP <85> “Bacterial Endotoxins Test”, regardless of an individual component endotoxins limit. Intrathecally-administered products, ophthalmics, or devices (see question 11 for devices) may have endotoxins limits that are not based on the calculation for parenterally administered products. FDA encourages firms to check with the appropriate office or review division about these products.

품질 고도화 설계 개념을 적용할 때 엔도톡신 시험 전략은 일관된 최종제품 품질을 보장하기 위해 제품 및 공정 이해와 위험관리를 결합한 것에 근거하여야 한다. 엔도톡신 생성 또는 유입 위험이 있는 생산 공정 영역을 평가하는 데 적절한 공정 중 시험을 사용하여야 한다. 많은 업체가 이미 공정용수를 포함한 입고 원료와 구성품의 엔도톡신 오염을 모니터링하는 프로그램을 운영하고 있다. 시험하는 제조 단계별 공정 중 한도를 정할 때에는 완제품 출하 기준을 고려하여야 한다. 제품 오염의 상대적 위험을 평가하기 위해서는, 제품 품질의 경향 분석을 쉽게 하고 이탈이 기준을 넘어 제품 부적합을 일으키기 전에 이를 찾아 바로잡을 수 있도록 한도시험보다 정량시험이 바람직할 수 있다.

When implementing Quality by Design concepts, the strategy for endotoxins testing should be based upon product and process understanding in combination with risk management to ensure consistent final product quality. The appropriate in-process testing should be used to evaluate the production process areas at risk of endotoxins formation or incursion. Many firms already have programs for monitoring incoming ingredients and components, including the processing water, for endotoxins contamination. The finished product release specification should be considered when determining in-process limits for each phase of manufacturing tested. For purposes of evaluating the relative risk of product contamination, quantitative testing may be preferable to limit testing to facilitate product quality trending and to identify and correct excursions before they exceed the specification and cause product failure.

엔도톡신 한도는 사례별로 타당성을 입증하여야 하며, 관련 판매 허가신청 또는 변경신청마다 그 일부로 평가된다.

An endotoxins limit should be justified on a case-by-case basis, and will be evaluated as a part of each relevant marketing application or supplement.

일부 생물의약품에 대해서는 21 CFR 610.13(b)가 토끼 발열성물질 시험을 요구한다. 21 CFR 610.9에 따라 토끼 발열성물질 시험과 동등한 방법이 입증되면 21 CFR 610.13(b)의 요건은 면제될 수 있다.

For certain biological products, 21 CFR 610.13(b) requires a rabbit pyrogen test. The requirement in 21 CFR 610.13(b) may be waived if a method equivalent to the rabbit pyrogen test is demonstrated in accordance with 21 CFR 610.9.

사람 및 동물용 의약품의 경우 일부 USP 각조는 여전히 토끼 발열성물질 시험을 요구한다. 그러한 각조가 있더라도 업체가 동등한 발열성물질 검출을 입증할 수 있다면 엔도톡신 시험이나 대체 세포 기반 시험으로 대신할 수 있다. 해당 FDA 심사 부서는 단핵구 활성화 같은 대체 방법을 사례별로 검토한다.

For human and animal drugs, some USP monographs still require a rabbit pyrogen test. Even with such monographs, a firm may substitute an endotoxins test or alternative cell- based test if the firm can demonstrate equivalent pyrogen detection. The appropriate FDA review division will consider alternative methods, such as monocyte activation, on a case-by-case basis.

의료기기와 의약품 원료의 경우, 업체는 비엔도톡신 발열성물질이 존재할 위험을 평가하여야 한다. 위해성 평가에서 비엔도톡신 발열성물질이 존재할 수 있다고 나타나면 토끼 발열성물질 시험을 사용하는 것이 더 적절할 수 있다.

For devices and drug materials, firms should assess the risk of the presence of non- endotoxin pyrogens. If the risk assessment indicates that non-endotoxin pyrogens may be present, it may be more appropriate to use the rabbit pyrogen test.

세균 엔도톡신 시험법은 시험 물품의 물리적·화학적 특성과 관련된 다양한 간섭을 받는다. 이러한 간섭을 검체 희석(MVD까지)이나 밸리데이션된 다른 검체 조제 방법으로 줄일 수 없는 경우 업체는 토끼 발열성물질 시험을 사용하여야 한다.

Bacterial endotoxins assays are subject to a variety of interferences related to the physical and chemical properties of the test article. Where such interferences cannot be mitigated through sample dilution (up to the MVD) or other validated means of sample preparation, firms should use the rabbit pyrogen test.

여러 동물 종에 사용하도록 표시된 동물용 제품의 경우, 한도는 가장 작은 종에 사용하는 최대 제품 용량을 근거로 하여야 한다. 표시에 어린 동물과 성체 동물에 사용할 수 있다고 되어 있으면 어린 동물을 최악의 경우로 본다. 용량 계산에 동물 체중이 필요하면 업체는 해당 종의 평균 체중을 사용하여야 한다.

For a veterinary product labeled for use in multiple species, the limit should be based on the maximum product dose used on the smallest species. If the label indicates that the product may be used on juvenile and adult animals, the juvenile is considered the worst case. If the weight of the animal is required to calculate the dose, firms should use an average weight for that species.

일부 동물의 평균 체중 목록은 FDA 산업계 가이던스 수성 매질에 가용성으로 간주되는 원료의약품을 함유한 가용성 산제 경구 제형 제품 및 A형 약용 물품의 생물학적 동등성 입증(Demonstrating Bioequivalence for Soluble Powder Oral Dosage Form Products and Type A Medicated Articles Containing Active Pharmaceutical Ingredients Considered to Be Soluble in Aqueous Media, 2023년 6월)을 참조한다. 그 가이던스에 없는 동물 체중은 FDA 동물의약품센터(Center for Veterinary Medicine)에 문의한다.

For a listing of some average animal weights, see the FDA guidance for industry Demonstrating Bioequivalence for Soluble Powder Oral Dosage Form Products and Type A Medicated Articles Containing Active Pharmaceutical Ingredients Considered to Be Soluble in Aqueous Media (June 2023). For animal weights not listed in that guidance, please contact FDA’s Center for Veterinary Medicine.

의료기기·방사선보건센터(Center for Devices and Radiological Health, CDRH)는 USP 제<161>장 “의료기기 ‒ 세균 엔도톡신 및 발열성물질 시험”에 기술된 USP 엔도톡신 표준품과 EU/mL로 나타낸 의료기기 추출액의 엔도톡신 한도를 채택하였다. 이 USP 장은 그 적용 범위에 속하는 의료기기의 엔도톡신 한도를 제시한다. 의료기기의 이러한 엔도톡신 한도는 기기의 사용 목적과 기기가 접촉하는 대상(예: 혈액, 심혈관계, 뇌척수액, 척수강내 투여 경로, 영구 이식 기기, 피하 이식 기기)에 따라 달라진다.²⁷

The Center for Devices and Radiological Health (CDRH) has adopted the USP Endotoxin Reference Standard and endotoxin limits for medical device extracts expressed in EU/mL as stated in USP Chapter <161> “Medical devices ‒ Bacterial Endotoxin and Pyrogen Tests”. This USP chapter provides the endotoxin limits for medical devices within its scope. These endotoxin limits for a medical device are dependent on the intended use of the device and what the device contacts (e.g., blood, the cardiovascular system, cerebrospinal fluid, intrathecal routes of administration, permanently implanted devices, and devices implanted subcutaneously).²⁷

의료기기의 경우, 아래에 기술한 추출 부피 권고에 따를 때 심혈관계와 림프계에 직접 또는 간접적으로 접촉하는 제품의 엔도톡신 한도는 0.5 EU/mL 또는 20 EU/device이다. 뇌척수액과 접촉하는 기기의 엔도톡신 한도는 0.06 EU/mL 또는 2.15 EU/device이다. 안구 내 환경에 직접 또는 간접적으로 접촉하는 기기에는 더 낮은 엔도톡신 한도가 적용될 수 있다. 구체적인 권고는 해당 심사 부서에 문의한다.

For medical devices, using the extraction volume recommendations described below, the endotoxin limit is 0.5 EU/mL or 20 EU/device for products that directly or indirectly contact the cardiovascular system and lymphatic system. For devices in contact with cerebrospinal fluid, the endotoxin limit is 0.06 EU/mL or 2.15 EU/device. For devices that are in direct or indirect contact with the intraocular environment, a lower endotoxins limit may apply. Please contact the appropriate review division for specific recommendations.

시험용 용출액/추출액을 조제하는 과정은 기기마다 다를 수 있다. 어떤 의료기기는 세척액을 흘려 보낼 수 있고, 어떤 기기는 담가야 하며, 또 어떤 기기는 분해가 필요할 수 있다. 다른 공정서 표준에서 달리 지시하지 않는 한, FDA가 권고하는 세척 부피는 다음과 같다. (1) 시험 단위 10개 각각을 비발열성 물 40 mL로 세척하여야 한다. (2) 유난히 작거나 큰 기기의 경우, 환자와 접촉하는 기기의 표면적을 세척액 또는 추출액 부피를 정하는 조정 인자로 사용할 수 있다. 엔도톡신 한도는 그에 맞추어 조정할 수 있다. 어떤 경우든 세척/추출 절차로 인해 엔도톡신이 USP <85>에서 권고하는 것보다 더 많이 희석되어서는 안 된다. 저해/촉진 시험에서는 세척/추출 용액과 기기 용출액/추출액을 모두 시험하여야 한다.

The process of preparing an eluate/extract for testing may vary from device to device. Some medical devices can be flushed, some may have to be immersed, while others may need disassembly. Unless otherwise directed by another compendial standard, our recommended rinse volumes include the following: (1) each of the 10 test units should be rinsed with 40 mL of non-pyrogenic water; (2) for unusually small or large devices, the surface area of the device that contacts the patient may be used as an adjustment factor in selecting the rinse or extract volume. The endotoxins limit can be adjusted accordingly. In any case, the rinse/extract procedure should not result in a greater dilution of endotoxin than recommended in USP <85>. For inhibition/enhancement testing, both the rinse/extract solution and the device eluate/extract should be tested.

시험 또는 간섭 측면에서 어려움이 있는 의료기기의 예로는 항응고제로 코팅된 기기, 중금속을 함유한 기기, 미립자가 있는 기기가 있다. 이러한 경우 간섭을 처리하는 방법으로 분해, 희석, 완충액 첨가, 원심분리 또는 여과를 사용할 수 있다.

Examples of medical devices with testing or interference challenges include devices that are coated with anticoagulant, contain heavy metals, or that have particulates. In these situations, treatments for interferences can include digestion, dilution, and addition of buffers, centrifugation, or filtration.

같은 수술 절차 중이거나 같은 수술 부위에 배치하는 경우, 한 제조업자의 같은 기기 여러 단위는 일반적으로 그 절차 중에 사용하는 단일 기기와 같은 엔도톡신 한도를 충족하여야 한다. 같은 기기 여러 단위가 한 절차에 사용되는 것으로 알려져 있거나 그렇게 사용하도록 의도된 경우, 제조업자는 이 가이던스에서 제시한 전체 엔도톡신 한도에서 벗어나는 것에 대해 타당성을 입증하여야 한다.

During the same surgical procedure or placement in the same surgical site, multiple units of the same device from one manufacturer should generally meet the same endotoxins limit as a single device administered during the procedure. In instances where multiple units of the same device are known or intended for use in a single procedure, manufacturers should justify any deviation from the overall endotoxins limit identified in this guidance.

의료기기 제조업자가 이 가이던스나 인정 표준에서 크게 벗어나는 시험을 사용하려는 경우, 연방 식품·의약품·화장품법(Federal Food, Drug, and Cosmetic Act, 이하 법) 510(k)항에 따른 시판 전 신고(510(k)) 또는 법 515항에 따른 시판 전 승인 신청(PMA) 변경신청이 필요할 수 있다. 크게 벗어나는 경우에는 더 높은 엔도톡신 농도 출하 기준, 저해/촉진 시험을 위한 3개 미만 로트에서의 검체 채취, 엔도톡신에 대한 더 낮은 감도, 그리고 이 가이던스에서 권고하는 것보다 엔도톡신을 더 많이 희석하는 기기 세척 계획서가 포함되며, 반드시 이에 국한되는 것은 아니다.

When a manufacturer of medical devices plans to use testing that deviates significantly from this guidance or recognized standards, a premarket notification (510(k)) under section 510(k) of the Federal Food, Drug, and Cosmetic Act (the Act) or a premarket approval application (PMA) supplement under section 515 of the Act may be required. Significant deviations include, but are not necessarily limited to: higher endotoxin concentration release criteria, sampling from fewer than three (3) lots for inhibition/enhancement testing, lesser sensitivity to endotoxins, and a device rinsing protocol resulting in greater dilution of endotoxins than that recommended in this guidance.

이상적으로는 시험 안에서 간섭/촉진 특성이 없는 한 희석하지 않은 제품으로 선별 시험을 하여야 한다. 그러나 일부 제품 처방에서는 성분이 시험을 간섭한다. 이러한 처방에 대해 USP는 간섭 또는 촉진 특성을 극복하도록 제품을 희석할 것을 권고한다. 계산된 MVD는 엔도톡신 한도가 검출되는 검체 희석배수이지만, 정기 시험의 희석배수가 되어서는 안 된다. 개발 중에 제품 간섭이 나타나면, FDA는 업체가 간섭 조건을 중화하는 가장 낮은 제품 희석배수를 정하도록 권고한다.

Ideally, the undiluted product should be screened as long as there is no interfering/enhancing property within the test. However, in some product formulations, the ingredients interfere with the test. For such formulations, the USP recommends that the product be diluted to overcome interference or enhancement properties. The calculated MVD is the dilution of a sample at which the endotoxins limit would be detected, but it should not be the regular testing dilution. When product interference is encountered during development, FDA recommends that the firm determine the lowest product dilution that would neutralize the interfering condition.

FDA는 업체가 이후의 제품 선별 시험을 간섭을 중화한 수준 바로 위의 제품 희석배수에서 시작하도록 권고한다. 예를 들어 제품의 MVD가 1:100이고 제품이 1:10에서는 저해를 보이지만 1:20에서는 보이지 않는다면, 1:30에서 제품을 선별 시험하는 것이 가장 좋을 수 있다. 이 수준에서 세균 엔도톡신이 검출되면 업체는 실제 엔도톡신 양을 적정하기 위해 해당 제품으로 전체 정량을 수행하여야 한다.

FDA recommends that firms begin subsequent product screening at a product dilution just above the level that neutralized the interference. For example, if the product has an MVD of 1:100, and the product displays inhibition at the 1:10, but not at the 1:20, it may be best to screen product at 1:30. If bacterial endotoxins are detected at this level, then the firm should conduct full enumeration with the product to titrate the true amount of endotoxins.

대조 표준 엔도톡신(control standard endotoxins, CSE)은 국제 또는 국가 표준품 이외의 엔도톡신 조제물로서, 그 교정이 국제 표준 엔도톡신 표준품으로 소급되는 것이다. CSE는 2차 또는 3차 표준품일 수 있으며, 대개 시약 제조업자가 정해진 분석 조건에서 특정 시약 로트와 함께 사용하도록 제조하고 인증한다. CSE는 표준곡선 교정물질 조제와 분석 대조물질로 인정되는 공급원이 되었으며, 최종 사용자의 비용을 절감하고 1차 표준품 재고를 보존하는 데 도움이 되었다. FDA는 국제 표준 엔도톡신 표준품에 대해 적절히 교정된 CSE를 계속 사용하도록 권장한다.

Control standard endotoxins (CSEs) are endotoxin preparations other than the international or national reference standards that are traceable in their calibration to the international reference endotoxins standard. CSEs may be secondary or tertiary standards and are usually manufactured and certified by a reagent manufacturer for use with a specific lot of reagent under defined assay conditions. CSEs have become an accepted source for preparation of standard curve calibrators and as assay controls, and have provided a cost saving to end users and helped to preserve the inventory of primary standards. FDA encourages the continued use of CSEs that are suitably calibrated to the international reference endotoxins standard.