이 가이던스는 이 주제에 관한 FDA의 현재 견해를 나타낸다. 이 가이던스는 누구에게도 어떠한 권리를 만들거나 부여하지 않으며, FDA나 일반 대중을 구속하지 않는다. 적용 법률과 규정의 요건을 충족한다면 다른 접근 방법을 사용할 수 있다. 다른 접근 방법을 논의하려면 해당 FDA 직원에게 연락한다. 담당 FDA 직원을 찾을 수 없으면 이 가이던스 표지에 적힌 해당 전화번호로 연락한다.

This guidance represents the Food and Drug Administration’s (FDA’s) current thinking on this topic. It does not create or confer any rights for or on any person and does not operate to bind FDA or the public. You can use an alternative approach if the approach satisfies the requirements of the applicable statutes and regulations. If you want to discuss an alternative approach, contact the appropriate FDA staff. If you cannot identify the appropriate FDA staff, call the appropriate number listed on the title page of this guidance.

FDA는 세포·유전자치료제(CGT) 제조업자인 여러분에게 역가를 측정하는 시험¹의 개발에 관한 권고를 제공하기 위하여 이 가이던스를 발행한다.² 이 권고는 임상시험계획(IND)³ 또는 생물의약품 허가신청(BLA)⁴을 뒷받침할 수 있는 역가 정보를 명확히 하기 위한 것이다. 역가 측정은 특정 제품에 맞추어 특별히 설계되므로, 이 가이던스는 특정 유형의 역가 시험에 관한 권고를 하지 않으며 제품 출하의 허용기준도 제시하지 않는다.

We, FDA, are issuing this guidance to provide you, manufacturers of cellular and gene therapy (CGT) products, with recommendations for developing tests¹ to measure potency.² These recommendations are intended to clarify the potency information that could support an Investigational New Drug Application³ (IND) or a Biologics License Application⁴ (BLA). Because potency measurements are designed specifically for a particular product, this guidance does not make recommendations regarding specific types of potency assays, nor does it propose acceptance criteria for product release.

이 가이던스는 관련 문서(참고문헌 1~12)를 보완하기 위한 것으로, 현재 발행된 어떤 가이던스 문서도 대체하거나 폐지하지 않는다. 다만 2008년 10월자 초안 가이던스 「Guidance for Industry: Potency Tests for Cellular and Gene Therapy Products」(2008년 10월 9일, 73 FR 59635)는 이 가이던스로 최종 확정된다.

This guidance is intended to supplement related documents (Refs. 1 through 12) and does not replace or supersede any currently published guidance documents, with the exception that this guidance finalizes the draft guidance entitled “Guidance for Industry: Potency Tests for Cellular and Gene Therapy Products” dated October 2008 (October 9, 2008, 73 FR 59635).

이 가이던스는 공중보건서비스법(PHS Act) 351항(42 U.S.C. 262)에 따라 FDA 생물의약품평가연구센터(CBER) 세포·조직·유전자치료제실(OCTGT)이 심사하는 CGT 제품⁵에만 적용된다(참고문헌 1, 2). 이 가이던스는 CGT 제품에 해당하는 치료용 백신에는 적용되지만, CGT 제품이 아닌 치료용 백신에는 적용되지 않는다는 점에 유의한다.

This guidance applies only to CGT products⁵ reviewed by FDA’s Office of Cellular, Tissue and Gene Therapies (OCTGT), Center for Biologics Evaluation and Research (CBER), under section 351 of the Public Health Service Act (PHS Act) (42 U.S.C. 262) (Refs. 1 and 2). Note that this guidance applies to therapeutic vaccines that are CGT products; however, it does not apply to therapeutic vaccines that are not CGT products.

또한 이 가이던스는 21 CFR 1271.10에 기술된 바와 같이 PHS Act 361항(42 U.S.C. 264)에 따라 규제되는 제품이나 21 CFR 820에 따라 의료기기로 규제되는 제품에는 적용되지 않는다. 아울러 이 가이던스는 CDER 또는 CBER 백신연구심사실(OVRR)이나 CBER 혈액연구심사실(OBRR)이 심사하는 생물의약품에는 적용되지 않는다.

This guidance also does not apply to products regulated under section 361 of the PHS Act (42 U.S.C. 264) as described under 21 CFR 1271.10 or to products regulated as medical devices under 21 CFR Part 820. Furthermore, this guidance does not apply to biological products reviewed by CDER or by CBER’s Office of Vaccine Research and Review (OVRR) or CBER’s Office of Blood Research and Review (OBRR).

이 가이던스를 포함한 FDA의 가이던스 문서는 법적 강제력이 있는 책임을 정하지 않는다. 가이던스는 어떤 주제에 관한 FDA의 현재 견해를 설명하며, 특정 규정이나 법률 요건을 인용하지 않는 한 권고로만 보아야 한다. FDA 가이던스에서 should라는 말은 어떤 것이 제안되거나 권고된다는 뜻이며, 요구된다는 뜻은 아니다.

FDA’s guidance documents, including this guidance, do not establish legally enforceable responsibilities. Instead, guidances describe the FDA’s current thinking on a topic and should be viewed only as recommendations, unless specific regulatory or statutory requirements are cited. The use of the word should in FDA’s guidances means that something is suggested or recommended, but not required.

역가는 “적절한 실험실 시험으로, 또는 의도한 방법으로 제품을 투여하여 얻은 적절히 관리된 임상 자료로 나타나는, 주어진 결과를 일으키는 제품의 특이적 능력 또는 역량”으로 정의된다(21 CFR 600.3(s)). 함량(strength)⁶은 “적절한 실험실 시험으로, 또는 적절히 개발되고 관리된 임상 자료로 나타나는 완제의약품의 역가, 즉 치료 활성. . . .”으로 정의된다(21 CFR 210.3(b)(16)). 규정은 “역가 시험은 이 장 § 600.3(s)의 정의에 따른 역가 해석을 충족하기에 적절한 방식으로 그 역가를 나타내도록 각 제품에 맞추어 특별히 설계된 시험관내 시험 또는 생체내 시험, 또는 둘 다로 구성되어야 한다”고 요구한다(21 CFR 610.10).

Potency is defined as “the specific ability or capacity of the product, as indicated by appropriate laboratory tests or by adequately controlled clinical data obtained through the administration of the product in the manner intended, to effect a given result.” (21 CFR 600.3(s)). Strength⁶ is defined as “[t]he potency, that is, the therapeutic activity of the drug product as indicated by appropriate laboratory tests or by adequately developed and controlled clinical data. . . .” (21 CFR 210.3(b)(16)). Regulations require that “[t]ests for potency shall consist of either in vitro or in vivo tests, or both, which have been specifically designed for each product so as to indicate its potency in a manner adequate to satisfy the interpretation of potency given by the definition in § 600.3(s) of this chapter.” (21 CFR 610.10).

역가 시험은 다른 여러 시험과 함께 제품 적합성 시험,⁷ 동등성/동질성 평가(comparability study)(참고문헌 3), 안정성시험(참고문헌 4)의 일부로 수행된다. 이 시험들은 제품 품질과 제조 관리에 관련된 제품 특성을 측정하는 데 쓰이며, 임상시험의 모든 단계에서 사용하는 제품의 확인, 순도, 함량(역가) 및 안정성을 보증하기 위하여 수행된다. 마찬가지로 역가 측정은 임상시험의 모든 단계와 시판 허가 이후에 정해진 기준 및 시험방법 또는 허용기준에 맞는 제품 로트만 투여됨을 입증하는 데 쓰인다.

Potency tests, along with a number of other tests, are performed as part of product conformance testing,⁷ comparability studies (Ref. 3), and stability testing (Ref. 4). These tests are used to measure product attributes associated with product quality and manufacturing controls, and are performed to assure identity, purity, strength (potency), and stability of products used during all phases of clinical study. Similarly, potency measurements are used to demonstrate that only product lots that meet defined specifications or acceptance criteria are administered during all phases of clinical investigation and following market approval.

PHS Act 351항에 따라 규제되는 모든 생물의약품은 BLA 승인을 받으려면 안전성, 순도 및 역가에 관해 정해진 요건을 충족하여야 한다(연방 식품·의약품·화장품법(FDC Act)(21 U.S.C. 321 et seq.), 21 CFR 601.2). CGT의 경우 제품 적합성 시험(21 CFR 601.20(a))과 제조공정 관리(21 CFR 601.20(c))는 FDA의 완제의약품 CGMP(현행 우수 의약품 제조 및 품질관리 기준) 규정(21 CFR 210, 211⁸)과 생물의약품 규정(21 CFR 600)을 준수하여야 한다.

All biological products regulated under section 351 of the PHS Act must meet prescribed requirements of safety, purity and potency for BLA approval; Federal Food, Drug and Cosmetic Act, (FDC Act), (21 U.S.C. 321 et seq.); (21 CFR 601.2). For CGT, product conformance testing (21 CFR 601.20(a)) and control of the manufacturing process (21 CFR 601.20(c)) are required to comply with FDA’s Current Good Manufacturing Practice (CGMP) For Finished Pharmaceuticals regulations (21 CFR Parts 210 and 211⁸) as well as the biologics regulations (21 CFR Part 600).

“허가된 제품의 어떠한 로트도 그 제품에 적용되는 기준에 대한 적합성 시험을 완료하기 전에 제조업자가 출하하여서는 아니 된다”(21 CFR 610.1). 이 시험에는 역가, 무균, 순도 및 확인 시험이 포함된다(21 CFR 610 Subpart B). 이 요건은 로트가 1회 투여분으로 정의될 수 있는 자가 제품과 단일 환자용 동종 제품을 포함하여 모든 생물의약품에 적용된다.

“No lot of any licensed product shall be released by the manufacturer prior to the completion of tests for conformity with standards applicable to such product,” (21 CFR 610.1), which include tests for potency, sterility, purity, and identity (21 CFR Part 610, Subpart B). These requirements apply to all biological products, including autologous and single patient allogeneic products, where a lot may be defined as a single dose.

일부 CGT 제품은 활성성분⁹ 외에 과학 문헌에서 흔히 “면역증강제(adjuvant)”¹⁰라고 부르는 물질을 하나 이상 함유할 수도 있다. 면역증강제 시험 요건 전반을 다루는 것은 이 문서의 범위를 벗어난다. 다만 “면역증강제가 제품의 안전성이나 역가에 나쁜 영향을 미치지 않는다는 충분한 증거가 없으면 면역증강제를 제품에 넣어서는 아니 된다”(21 CFR 610.15(a))는 점에 유의하여야 한다. 면역증강제를 하나 이상 포함하는 제품의 역가 시험에 관한 추가 정보는 CBER 심사팀과 협의¹¹할 것을 권고한다.

Some CGT products may also contain, in addition to the active ingredient⁹, one or more substances commonly referred to in the scientific literature as an “adjuvant”¹⁰. A complete discussion of the requirements for adjuvant testing is beyond the scope of this document. However, it should be noted that “an adjuvant shall not be introduced into a product unless there is satisfactory evidence that it does not affect adversely the safety or potency of the product” (21 CFR 610.15(a)). We recommend that you consult¹¹ with your CBER review team for additional information regarding potency testing for products that include one or more adjuvants.

FDA 규정은 각 제품에 적절한 역가 측정 방법을 정하는 데 상당한 유연성을 허용한다. 역가는 개별 제품 특성에 근거하여 결정되므로, 역가 시험의 적절성은 사례별로 평가한다. 그러나 허가된 생물의약품의 출하 시험에 쓰이는 모든 역가 시험은 다음을 포함하여 해당 생물의약품 규정과 CGMP 규정을 준수하여야 한다.

FDA regulations allow for considerable flexibility in determining the appropriate measurement(s) of potency for each product. Potency is determined based on individual product attributes; therefore, the adequacy of potency tests is evaluated on a case-by-case basis. However, all potency assays used for release testing of licensed biological drug products must comply with applicable biologics and CGMP regulations including:

초기 임상시험에서는 위에 기술한 허가된 생물의약품의 요건을 모두 충족하지 못할 수도 있다(참고문헌 6~8). 그럼에도 임상시험의 모든 단계에서 사용하는 제품의 확인, 품질, 순도 및 함량(21 CFR 312.23(a)(7)(i))과 안정성(21 CFR 312.23(a)(7)(ii))을 보증하는 자료를 제출하여야 한다. “그러한 보증에 필요한 정보의 양은 임상시험의 단계, 계획된 임상시험 기간, 제형, 그리고 달리 확보할 수 있는 정보의 양에 따라 달라진다.”(21 CFR 312.23(a)(7)(i)).

In early phase clinical investigations, it may not be possible to meet all of the requirements described above for licensed biological products (Refs. 6 through 8). Nonetheless, you must submit data to assure the identity, quality, purity and strength (21 CFR 312.23(a)(7)(i)) as well as stability (21 CFR 312.23(a)(7)(ii)) of products used during all phases of clinical study. “[T]he amount of information needed to make that assurance will vary with the phase of the investigation, the proposed duration of the investigation, the dosage form, and the amount of information otherwise available.” (21 CFR 312.23(a)(7)(i)).

CGT 제품은 복잡하여 역가 시험을 확립하는 데 상당한 어려움이 있을 수 있다(표 1 참조). CGT 제품의 개발을 돕기 위하여 FDA는 역가 시험을 단계적으로 도입하는 접근 방법을 권고한다. 역가 시험의 단계적 도입에 관한 일반 권고는 III.E항에 정리되어 있다. 이 문서 III항에서 설명하듯이, 역가 측정 방법은 제품을 개발해 감에 따라 발전하며 크게 바뀔 수 있다. 역가 측정 방법을 설계·평가·밸리데이션하는 과정에서 CBER 심사팀과 적시에 논의할 것을 권고한다.

The complexity of CGT products can present significant challenge(s) to establishing potency assays (see Table 1). To facilitate the development of CGT products, we recommend an incremental approach to the implementation of potency tests. General recommendations for progressive potency assay implementation are outlined in Section III.E. As described in Section III of this document, your potency measurement(s) will evolve and may change significantly as you develop your product. We recommend that you have timely discussions with your CBER review team as you design, evaluate and validate your potency measurement.

임상적 유효성을 예측하는 제품 특성을 단일 시험으로 적절히 측정할 수는 없다. 제조업자는 “실질적 증거(substantial evidence)”, 즉 제품이 표시기재 또는 제안된 표시기재에서 처방·권장·제안하는 사용 조건에서 표방하거나 표시한 효과를 낸다는 증거로 임상적 유효성을 입증한다(FDC Act 505(d)항). 일반적으로 임상적 유효성의 실질적 증거는 21 CFR 314.126(d)에 명시된 바와 같이 일관되게 제조된 제품으로 수행한 적절하고 잘 통제된 임상시험에서 얻는다(참고문헌 12). 역가 측정은 제품 특성분석 시험, 동등성/동질성 평가 및 안정성시험 계획서에 꼭 필요한 부분이며, 이들은 임상시험의 모든 단계에서 일관되게 제조된 제품이 투여됨을 확립하는 데 쓰인다.

There is no single test that can adequately measure those product attributes that predict clinical efficacy. Manufacturers demonstrate clinical effectiveness by “substantial evidence,” i.e., evidence that the product will have the effect it purports or is represented to have under the conditions of use prescribed, recommended, or suggested in the labeling or proposed labeling thereof (section 505(d) of the FDC Act). As a general matter, substantial evidence of clinical efficacy is obtained from adequate and well-controlled investigations conducted with a consistently manufactured product, as specified in 21 CFR 314.126(d) (Ref. 12). Potency measurements are a necessary part of product characterization testing, comparability studies, and stability protocols, which are used to establish that a consistently manufactured product is administered during all phases of clinical investigation.

잘 통제된 임상시험의 유효성 자료는 제품에 생물학적 활성이 있고 따라서 역가가 있다는 증거가 될 수 있다. 그러나 로트 출하를 위해 역가를 정량적으로 시험하는 데 임상시험 자료를 쓰는 것은 실용적인 방법이 아닐 수 있다(즉, 개별 제품 로트를 출하하기 전에 임상 자료를 얻지 못할 수 있고, 임상 자료가 개별 로트와 연결되지 않을 수 있다). 그래서 이 가이던스 문서는 제품의 역가를 측정하는 출하 시험을 개발하는 방법을 다룬다. 아래에서 설명하듯이, 임상 자료는 생물학적 활성과, 로트 출하·안정성시험 및/또는 동등성/동질성 평가에 쓸 수 있는 보다 실용적인 역가 측정 사이의 상관관계¹⁵를 확립하는 데 쓸 수 있다(III항 참조).

Efficacy data from well controlled clinical investigations can provide evidence that a product has biological activity, and thus is potent. However, use of clinical study data may not be a practicable method to quantitatively test for potency to release a lot (i.e., clinical data may not be available prior to release of individual product lots; clinical data may not be coupled to individual lots). That said, this guidance document will discuss ways to develop a release assay(s) to measure your product’s potency. As discussed below, clinical data may be used to establish a correlation(s)¹⁵ between biological activity and a more practical potency measurement(s) that can be used for lot release, stability, and/or comparability studies (see Section III).

CGT 제품은 복잡하므로, 의미 있고 타당한 역가 측정 방법을 개발하려면 제품의 생물학적 특성을 적절히 이해하여야 한다. 역가 측정 접근 방법을 정하고 다듬을 수 있도록 비임상 및 임상 개발 전반에 걸쳐 충분한 제품 특성분석 자료(즉, 분자적, 생화학적, 면역학적, 표현형적, 물리적 및 생물학적 특성)를 수집하여야 한다.

CGT products are complex, thus you need to acquire an appropriate understanding of the biological properties of your product in order to develop relevant and meaningful potency measurements. You should collect sufficient product characterization data (i.e., molecular, biochemical, immunologic, phenotypic, physical and biological properties) throughout preclinical and clinical development to inform and refine your approach to measuring potency.

역가 시험 설계의 기준이 될 생물학적 활성을 처음 정할 때에는 관련 비임상 시험, 개념 증명 시험, 초기 임상시험, 활용 가능한 과거 경험, 해당 제품군에 관련된 활용 가능한 표준물질과 대조물질을 고려하여야 한다. 이 정보로 기능에 기여하는 제품 특성과 생물학적 활성을 기본적으로 이해할 수 있다. 제품 개발 중 얻은 특성분석 자료는 처음 선택한 역가 시험을 뒷받침하거나, 제품 시판을 준비하면서 더 나은 역가 측정 방법으로 이어질 수 있다(제품 수명주기 고려사항은 III.E항 참조).

When initially determining the biological activity or activities that will guide your potency assay design, you should consider relevant pre-clinical investigations, proof of concept studies, early clinical studies, available historical experience, and available reference materials and controls related to your product class. This information may provide you with a basic understanding regarding product attributes and biological activities that contribute to function. Characterization data obtained during product development may provide support for the potency assay that you choose initially, or it may lead to an improved potency measurement as you prepare to market your product (see Section III.E for product lifecycle considerations).

제품 개발의 일환으로, 일상적인 로트 출하에 쓰는 시험 외에 폭넓은 제품 특성을 측정할 것을 권고한다. 탐색 시험은 어떤 제품 특성이 역가와 가장 잘 상관되는지 평가하는 데 도움이 될 수 있다. 탐색 시험의 목적은 의미 있고 타당한 역가 시험을 설계하는 데 도움이 될 제품 정보를 얻는 것이다. 다만 이 시험이 로트 출하 기준이 될 수도 있고 되지 않을 수도 있는 시험의 기준을 정하거나 허용기준을 부여하는 데 반드시 도움이 되는 것은 아니다. 평가하는 시험 가운데 일부는 로트 출하에 실용적이지 않을 수 있지만, 생물학적 활성이나 임상적 유효성, 또는 둘 다와 관련된 제품 특성에 관해 유용한 정보를 줄 수 있다.

As part of product development, we recommend that you measure a wide range of product attributes in addition to the tests used for routine lot release. Exploratory studies may help you to assess which product attribute(s) best correlate(s) with potency. The purpose of exploratory studies is to gain product information, which will help you to design meaningful and relevant potency assays; although these studies may not necessarily help you to set specifications or assign acceptance criteria for assays that may or may not become a specification for lot release. While some of the assays you evaluate may not be practical for lot release, they may provide you with helpful information about product attributes related to biological activity or clinical effectiveness, or both.

이상적으로는 역가 시험이 제품의 작용기전(즉, 관련 치료 활성 또는 의도한 생물학적 효과)을 나타내야 한다. 그러나 많은 CGT 제품은 작용기전(MOA)이 복잡하거나(예: 여러 생물학적 활성에 의존) 충분히 규명되지 않아, 어떤 제품 특성이 역가 측정에 가장 관련되는지 정하기 어렵다. 그럼에도 제품의 관련 생물학적 특성을 반영하는 역가 측정 방법을 개발하기 위해 모든 노력을 기울여야 한다. 예를 들어 유전자치료 벡터의 역가는 최소한 두 가지 생물학적 활성, 즉 세포에 유전자 서열을 전달하는 능력과 발현된 유전자 서열의 생물학적 효과에 의존한다. 따라서 역가 시험에는 유전자 전달의 측정과 전달된 유전자의 생물학적 효과가 모두 포함되어야 한다(제품 수명주기 고려사항은 III.E항 참조).

Ideally, the potency assay will represent the product's mechanism of action (i.e., relevant therapeutic activity or intended biological effect). However, many CGT products have complex (e.g., rely on multiple biological activities) and/or not fully characterized mechanisms of action (MOA), making it difficult to determine which product attributes are most relevant to measuring potency. Nonetheless, all attempts should be made to develop potency measurements that reflect the product’s relevant biological properties. For example, a gene therapy vector relies on at least two biological activities for its potency: the ability to transfer a genetic sequence to a cell; and the biological effect of the expressed genetic sequence. Therefore, the potency assay should incorporate both a measure of gene transfer and the biological effect of the transferred gene (see Section III.E for product lifecycle considerations).

또한 CGT 제품의 추정 MOA는 둘 이상의 활성성분(예: 여러 세포 유형, 여러 벡터, 다중 에피토프 백신)에 의존할 수 있다. 일부 복잡한 제품(예: 세포 종양 백신)은 어떤 성분이 역가에 기여하는지 불분명할 수 있다. 21 CFR 211.165에 따라 완제의약품의 각 배치는 출하 전에 각 활성성분의 확인과 함량을 포함하여 완제의약품 최종 기준에 만족스럽게 적합함을 적절한 실험실 시험으로 판정하여야 한다는 점에 유의한다. 따라서 제품에 활성성분이 둘 이상 들어 있으면, 시험 하나로는 각 활성성분의 활성을 측정하기에 부족할 수 있으므로 제품의 역가를 측정하는 데 둘 이상의 시험이 필요할 수 있다(III.B.3항). 아울러 시험을 설계할 때에는 간섭이나 상승작용처럼 활성성분 사이에 생길 수 있는 비가산적 효과도 고려하여야 한다.

In addition, the proposed MOA for CGT products may be dependent on more than one active ingredient (e.g., multiple cell types, multiple vectors, multi-epitope vaccines). For some complex products (e.g., cellular tumor vaccines), there could be ambiguity about which ingredients contribute to potency. Note that under 21 CFR 211.165, for each batch of drug product, there must be appropriate laboratory determination of satisfactory conformance to final specifications for the drug product, including the identity and strength of each active ingredient prior to release. Thus, if your product contains more than one active ingredient you might need more than one assay to measure potency of the product because one assay might be insufficient to measure the activity of each of the active ingredients (Section III.B.3). Additionally, when designing your assay(s), you should also consider the potential non-additive effects between active ingredients, such as interference or synergy.

생물의약품의 역가를 평가하는 전통적인 접근 방법은, 주어진 결과를 일으키는 제품의 특이적 능력과 관련된 활성을 측정하면서 II.B항에 열거한 기준도 충족하는 정량적 생물학적 시험(bioassay)을 개발하는 것이다. 생물학적 시험은 살아 있는 생물학적 계 안에서 제품의 활성성분을 평가하여 역가를 측정할 수 있다. 생물학적 시험에는 생체내 동물시험, 시험관내 장기·조직·세포 배양계, 또는 이들의 조합이 포함될 수 있다. 시험관내 시험 또는 생체내 시험을 사용할 수 있지만, 가능한 경우 언제나 동물 사용을 책임 있게 줄일 것을 권장한다(참고문헌 13).

The traditional approach for assessing the potency of biological products is to develop a quantitative biological assay (bioassay) that measures the activity of the product related to its specific ability to effect a given result, and that also meets the criteria listed in Section II.B. Bioassays can provide a measure of potency by evaluating a product’s active ingredient(s) within a living biological system. Bioassays can include in vivo animal studies, in vitro organ, tissue or cell culture systems, or any combination of these. You may use in vitro or in vivo assays; however, we encourage the responsible limitation of animal use whenever possible (Ref. 13).

일부 CGT 제품은 제품의 특성 및/또는 특정 시험의 기술적 한계 때문에 정량적 생물학적 시험의 개발이 복잡할 수 있다(표 1 참조). 적합한 생물학적 시험을 개발할 수 없는 경우에는 생물학적 활성의 대리 측정을 찾아야 할 수 있다. 예를 들어 실용적이면서 로트 출하에 적절한 성능 특성을 보이는 비생물학적 분석 시험을 사용해야 할 수 있다. 분석 시험은 제품의 면역화학적, 생화학적 및/또는 분자적 특성을 평가하여 폭넓은 제품 특성분석 자료를 제공할 수 있다. 대리 측정이 제품 특이적인 관련 생물학적 활성과의 상관관계로 입증될 수 있다면, 이러한 특성으로 역가를 입증할 수 있다(III.C항, 참고문헌 14, 15 참조). 의미 있는 상관관계를 확립하려면 이 문서 전반에서 권고한 대로 엄격한 제품 특성분석 시험을 수행하여야 한다.

Development of a quantitative bioassay for some CGT products may be complicated by properties of the product and/or technical limitations of certain assays (see Table 1). In cases where development of a suitable bioassay is not feasible it may be necessary to identify a surrogate measurement of biological activity. For example, you may need to use a non-biological analytical assay(s) that is practical and demonstrates adequate performance characteristics for lot release. Analytical assays can provide extensive product characterization data by evaluating immunochemical, biochemical, and/or molecular attributes of the product. These attributes may be used to demonstrate potency if the surrogate measurement(s) can be substantiated by correlation to a relevant product-specific biological activity(s) (see Section III.C, Refs. 14 and 15). To establish meaningful correlations, you should conduct rigorous product characterization testing, as recommended throughout this document.

많은 경우 단일 생물학적 시험이나 분석 시험으로는 역가를 적절히 측정하지 못할 수 있다. 그 이유로는 다음과 같은 것이 있을 수 있다.

In many cases, a single biological or analytical assay may not provide an adequate measure of potency. The following are some potential reasons:

시험 하나로 역가를 나타내는 제품 특성을 측정하기에 충분하지 않으면, 품질·일관성·안정성과 관련된 서로 다른 제품 특성을 측정하는 상호 보완적인 시험 여러 개를 개발하는 것과 같은 대안적 접근 방법을 쓸 수 있다. 이러한 상호 보완적 시험을 함께 사용하고 그 결과가 관련 생물학적 활성과 상관될 때, 역가를 적절히 측정할 수 있어야 한다. 이러한 시험 묶음(시험 매트릭스(assay matrix)라 한다)은 생물학적 시험끼리의 조합, 생물학적 시험과 분석 시험의 조합, 또는 분석 시험만으로 구성될 수 있다(참고문헌 15, 16). 시험 매트릭스에는 정량적 결과(예: 활성 단위) 및/또는 정성적 결과(예: 적합/부적합)를 내는 시험이 포함될 수 있다.

If one assay is not sufficient to measure the product attribute(s) that indicates potency, then an alternative approach could be used, such as developing multiple complementary assays that measure different product attributes associated with quality, consistency and stability. When used together and when results are correlated with a relevant biological activity, these complementary assays should provide an adequate measure of potency. Such a collection of assays (referred to as an assay matrix) might consist of a combination of biological assays, biological and analytical assays, or analytical assays alone (Refs. 15 and 16). The assay matrix may include assays that give a quantitative readout (e.g., units of activity) and/or qualitative readout (e.g., pass/fail).

로트 출하, 안정성시험 또는 동등성/동질성 평가의 역가 판정에 시험 매트릭스의 일부로 정성 시험을 쓰는 경우, 하나 이상의 정량 시험을 함께 사용하여야 한다(II.B항 참조).

If qualitative assays are used as part of an assay matrix to determine potency for lot release, stability or comparability studies, they should be accompanied by one or more quantitative assays (see Section II.B).

분석 시험이나 시험 매트릭스를 생물학적 활성의 대리 측정으로 사용하여 역가를 입증하려면, 대리 측정과 역가 관련 생물학적 활성 사이의 상관관계를 확립하기에 충분하고 과학적으로 타당한 자료(즉, 적절히 적격성 평가된 시험, 적절한 반복 수, 여러 로트 또는 다양한 환자 검체 등에 근거한 자료)를 제출하여야 한다. 상관관계 시험을 설계하기 전에 CBER 심사팀과 협의할 것을 권고한다.

To demonstrate potency using an analytical assay or assay matrix as a surrogate measurement of biological activity, you should provide sufficient, scientifically sound data (i.e., based on suitably qualified assays, an appropriate number of replicates, multiple lots or various patient samples, etc.) to establish a correlation between the surrogate measurement(s) and the biological activity related to potency. We recommend that you consult with your CBER review team prior to design of correlative studies.

대리 측정과 생물학적 활성 사이의 상관관계는 비임상/개념 증명 자료, 생체내 자료(동물 또는 임상), 시험관내 세포 또는 생화학 자료와의 비교를 비롯한 다양한 접근 방법으로 확립할 수 있다. 허가된 생물의약품의 역가 요건을 충족하기 위해 분석 시험을 생물학적 활성의 대리 측정으로 쓰기로 했다면, 위 II.B항에 열거한 기준을 충족하여야 한다. 또한 그 시험이 활성 제품과 비활성 또는 분해된 형태의 제품을 구별할 수 있음을 보여 주어야 하며, 충분히 통제된 시험을 수행하거나(IV항 참조) 밸리데이션된 분석 시험을 사용하여야 한다.

The correlative relationship between the surrogate measurement and biological activity may be established using various approaches, including comparison to preclinical/proof of concept data, in vivo data (animal or clinical), or in vitro cellular or biochemical data. If you choose to use an analytical assay as a surrogate measurement of biological activity to meet the potency requirements for licensed biological products, you will need to meet the criteria listed above in Section II.B. You should also show that the assay can discriminate between active product and an inactive or degraded form of the product; and perform sufficiently controlled studies (see Section IV) and/or employ a validated analytical assay.

대리 시험과 제품의 생물학적 활성 사이의 상관관계를 뒷받침하는 자료의 적합성은 사례별로 평가하며, 다음 사항에 따라 달라지거나 영향을 받는다.

The suitability of data used to support the correlative relationship between the surrogate assay and the biological activity of the product is evaluated on a case-by-case basis and depends on or is influenced by the following:

다른 역가 시험과 마찬가지로, 초기 임상시험 단계부터 시험 선택을 뒷받침할 제품 및 시험 특성분석 자료를 수집하기 시작하여야 한다.

As with any potency assay, you should start collecting product and assay characterization data to support your choice of assay during early investigational phases.

이 문서 전반에서 다루었듯이, 품질·역가·로트 간 일관성·안정성에 영향을 미치는 제품 변수를 이해하려면 철저한 제품 특성분석이 필요하다. 더욱이 이러한 변수를 이해하고 관리하는 것은 생산 로트 간 일관성을 입증하고 서로 다른 제조공정 및/또는 여러 시험의 동등성/동질성을 평가하는 데 필요하며, 어떤 제품 특성이 생물학적 활성 및/또는 유효한 제품과 관련되는지 판단하는 데에도 필요할 수 있다. 역가 측정 능력은 근본적으로 제품 특성분석과 관련되므로, 가능한 한 많은 제품 정보를 얻을 수 있도록 비임상 및 초기 임상시험 단계에서 제품 특성분석을 통해 역가 시험 개발을 시작하여야 한다.

As discussed throughout this document, thorough product characterization is necessary to understand the product parameter(s) that affect quality, potency, lot to lot consistency, and stability. Moreover, understanding and controlling these parameters will be necessary to demonstrate consistency between production lots, to assess comparability of different manufacturing processes and/or various assays, and may also be necessary to allow you to determine which product attributes are related to biological activity and/or an effective product. Because the ability to measure potency is fundamentally related to product characterization, you should initiate potency assay development by way of product characterization during preclinical and early clinical investigations to obtain as much product information as possible.

아울러 초기 제품 개발 단계에서 역가를 측정하면 다음과 같은 여러 이점이 있다.

In addition, measuring potency during early product development has a number of advantages, such as allowing you to:

비임상, 1상 및 2상 초기 시험 단계의 일부 제품에서는 관련 생물학적 특성에 관한 제한된 정량 정보로 충분할 수 있다. 시험 허용기준은 수치 범위로 정하고, 제조 및 임상 경험을 반영하도록 제품 개발 단계 전반에 걸쳐 조정하여야 한다. 초기 임상시험에 쓰는 제품 로트에 수행하는 역가 시험은 후기 임상시험에 쓰는 시험보다 허용 범위가 넓을 가능성이 높다.

For some products in pre-clinical, Phase 1 and early Phase 2 studies, limited quantitative information on relevant biological attributes may be sufficient. Assay acceptance criteria should be set as a numerical range and should be adjusted throughout the product development stages to reflect manufacturing and clinical experience. Potency assays performed on product lots used for early clinical studies are likely to have wider acceptance ranges than assays used in later phase investigations.

임상시험이 진행되고 제품 지식이 늘어남에 따라, 관련 생물학적 제품 특성을 정량적으로 평가하는 개선된 역가 측정 방법을 개발·도입하여야 한다(21 CFR 312.23(a)(7) 참조).

As clinical study progresses and product knowledge increases, you should develop and implement improved potency measurement(s) that quantitatively assesses relevant biological product attribute(s) (see 21 CFR 312.23(a)(7)).

후기 임상시험(즉, 3상, 확증 임상¹⁷)의 주된 목적은 제품 유효성에 관한 의미 있는 자료를 모으는 것이며, 유효성은 적절하고 잘 통제된 임상시험으로 판정한다. 적절하고 잘 통제된 임상시험의 한 요소는 역가가 비슷한 제품 로트를 투여하는 것이다. 정해진 역가 한도에 적합하여야 제품 로트가 환자에게 주어진 용량에서 기대한 대로 작용한다는 합리적 확신을 줄 수 있기 때문이다. 따라서 역가 시험 또는 시험 매트릭스의 설계와 허용기준은 제품 로트가 잘 규정되고, 생물학적으로 활성이 있으며, 일관되게 제조되었음을 보증할 수 있도록 적절한 역가 한도를 정하여야 한다.

The primary objective of later phase investigational studies (i.e., Phase 3, pivotal¹⁷) is to gather meaningful data about product efficacy, which is determined by adequate and well-controlled clinical trial(s). One aspect of an adequate and well controlled trial is administering product lots with similar potency, in that conformance to established limits for potency is necessary to provide reasonable confidence that product lots will perform as expected at a given dose in patients. Therefore, your potency assay or assay matrix design and acceptance criteria should establish appropriate limits for potency to assure that product lots are well-defined, biologically active, and consistently manufactured.

확증 임상시험에 사용할 제품 로트의 역가를 충분히 보증하지 못하면, 그 임상시험은 “명시된 목적을 달성하기에 설계가 미흡한” 것으로 판단되어 임상시험 보류(clinical hold) 조치를 받을 수 있다(21 CFR 312.42(b)(2)(ii)).

If you do not provide sufficient assurance of potency of product lots to be used in your pivotal trial(s), your trial may be considered “deficient in design to meet its stated objectives” and may be placed on clinical hold (21 CFR 312.42(b)(2)(ii)).

또한 허가를 위한 유효기간 설정에 쓰는 적합성 로트의 안정성시험에서는 정해진 한도를 갖춘 역가 시험 또는 시험 매트릭스를 사용하여야 한다(21 CFR 610.53, 참고문헌 4 참조). 안정성과 유효기간 설정에 쓰는 시험은 안정성 지시성(stability indicating)이 있음을 입증하여야 한다.

In addition, you should use a potency assay or assay matrix, with established limits, during stability testing of conformance lots used to establish expiry dating for licensure (see 21 CFR 610.53; Ref. 4). Assays used to establish stability and expiry dating should be demonstrated to be stability indicating.

생물의약품 허가를 받으려면 허용기준이 정해진 밸리데이션된 역가 시험 또는 시험 매트릭스를 BLA에 기술하고 그 타당성을 입증하여야 한다(21 CFR 601.2(a), 211.165(e), II.B항도 참조). 허용기준은 제조 경험으로 얻은 지식과, 제품 개발 및 임상시험의 모든 단계에서 수행한 시험으로 수집한 자료에 근거하여야 한다(참고문헌 5). 제품 적합성 로트나 확증 임상시험에 쓰기 위해 특별히 제조한 로트를 평가하면서, 이 자료를 반영하도록 허용기준을 다듬어야 한다.

To obtain a biologics license, a validated potency assay or assay matrix with defined acceptance criteria must be described and justified in the BLA (21 CFR 601.2(a) and 211.165(e), see also Section II.B). The acceptance criteria should be based on knowledge gained through manufacturing experience and data collected from assays performed during all phases of product development and clinical investigation (Ref. 5). As you evaluate product conformance lots or lots manufactured explicitly for use in your pivotal clinical studies, acceptance criteria should be refined to reflect these data.

이후 로트 출하 시험에 쓰려고 BLA에 정한 역가 시험 허용기준은 임상적 유효성을 입증한 확증 임상시험에 사용한 제품 로트에 대해 정한 역가 한도를 반영하여야 한다(FDC Act 505(d)항, 21 U.S.C. 351 참조).

The potency assay acceptance criteria defined in your BLA, which are intended for subsequent lot release testing, should reflect the potency limits established for product lots used in the pivotal clinical studies demonstrating clinical effectiveness (see FDC Act, Section 505(d), 21 U.S.C. 351).

제조 및 시험 방식은 제품 개발 중이나 허가 후, 또는 둘 다에서 발전하므로 역가 시험을 다시 평가해야 하거나 그렇게 하는 것이 유익할 수 있다. 승인된 신청에 쓰이는 시험을 변경하거나 새 시험을 제안하려면, 변경된 시험이나 새 시험이 계속 역가의 적절한 척도임을 입증하는 밸리데이션 시험을 수행하여야 한다(IV항 참조)(21 CFR 211.165(e)). 아울러 기존 시험과 제안한 변경 시험 또는 새 시험 사이의 동등성/동질성을 입증하기 위하여, 검체 수와 계획된 분석에 관한 통계적 고려를 반영해 설계한 시험을 수행하여야 한다. 시험 계획에는 시험 사이의 동등성을 입증하기 위해 미리 정한 허용기준이 포함되어야 한다.

Manufacturing and testing practices evolve during product development or post-licensure, or both, making it necessary and/or beneficial to re-evaluate your potency assay. If you plan to modify an assay that is used in an approved application or propose a new assay, you must perform validation studies (see Section IV) to demonstrate that the modified or new assay continues to be an appropriate measure of potency (21 CFR 211.165(e)). In addition, a study designed with statistical considerations for sample size and planned analysis, should be conducted to demonstrate comparability between the original assay and the proposed modified or new assay. The study plan should include pre-determined acceptance criteria to demonstrate equivalence between the assays.

제안하는 역가 시험 변경과 적절한 동등성/동질성 평가 자료는 승인된 신청에 대한 변경신청(supplement)으로 제출하여야 한다(21 CFR 601.12(b)(3)(vi)).

The proposed changes in the potency assay as well as appropriate comparability study data must be submitted as supplements to an approved application (21 CFR 601.12(b)(3)(vi)).

역가 측정 변경을 뒷받침하는 데 필요한 자료의 양은 다음을 비롯한 여러 요인에 따라 달라진다.

The quantity of data needed to support changes to potency measurements(s) will depend upon a number of factors, including:

임상시험 중 사용하는 역가 측정 방법을 변경하면, 그 시험의 적격성을 평가하고 제안한 변경의 타당성(예: 더 타당함, 더 실용적임, 더 정량적임)을 제시하여야 한다.

If you modify the potency measurement used during an investigational study, you should qualify the assay and provide justification for the proposed change(s) (e.g., more relevant, more practical, more quantitative).

이러한 권고는 가능한 경우 언제나 보존 검체(예: 제품, 표준물질, 핵심 시약)를 유지하는 것이 중요함을 강조한다. 적절한 보존 검체를 분석하지 않고서는 시험을 비교하거나 새 시험이 적절하게 작동하는지 판단하기 어렵다.

These recommendations emphasize the importance of maintaining retention samples (e.g., product, reference materials, critical reagents) whenever possible. It will be difficult to compare assays or determine if new assays are performing appropriately without analyzing appropriate retention samples.

CGMP 규정에 따라, 시험 설계는 시험이 의도한 용도에 적합한지 평가할 수 있는 자료를 수집할 수 있도록 하여야 한다(참고문헌 9~11, 예: 21 CFR 211.165, 21 CFR 211.194 참조). 여기에는 통계 분석이 가능할 만큼 충분한 반복 수를 두고, 편향을 줄이기 위해 검체를 무작위배치하며(예: 96웰 플레이트 내 위치와 관련된 편향 요인), 적절한 대조물질을 포함하는 것이 들어간다. 시험 설계에는 시험 변동성에 영향을 미치는 요인에 관한 지식도 반영하여야 한다. 따라서 시험방법의 변동 요인을 검토하고 시험 설계에서 이를 줄이는 조치를 취하여야 한다. 일부 변동 요인은 줄이더라도 피할 수 없으므로, 균형을 맞추고 측정하며 모델링하여야 한다.

In accordance with CGMP regulations, assay design should allow you to collect data that will permit you to evaluate if your assay(s) is suitable for its intended use (Refs. 9 through 11; see e.g., 21 CFR 211.165 and 21 CFR 211.194). This includes incorporating a sufficient number of replicates to allow for statistical analysis, using sample randomization to reduce biases (e.g., sources of bias associated with placement in a 96-well plate), and including appropriate controls. Assay design should also reflect knowledge of the factors that influence assay variability. Therefore, you should consider sources of variability in the assay method and take steps to limit them in your assay design. Some sources of variability, even when reduced, are unavoidable and so should be balanced, measured and modeled.

변동성을 줄이는 일반 원칙에는 적격성 평가된 시약, 적격성 평가와 교정을 마친 설비, 적절히 교육받고 자격을 갖춘 시험자를 쓰는 것이 포함된다. 상세한 표준작업절차서(SOP)를 따르고 적절한 대조물질을 갖추면 시험 변동성을 크게 줄일 수도 있다. 시험별 대조물질은 분석하는 제품과 사용하는 시험에 따라 달라진다. 표준물질과 대조물질을 포함한 핵심 시약을 장기적으로 확보할 수 있는지도 고려하여야 한다. 제조업자는 시험 설계 전략에 관한 더 자세한 논의를 여러 자료에서 참고할 수 있다(예: 참고문헌 14~21).

General principles for reducing variability include using qualified reagents, qualified and calibrated equipment, and adequately trained and qualified operators. Assay variability can also be substantially reduced by following detailed standard operating procedures (SOPs) and having appropriate controls in place. Assay-specific controls will depend on the product being analyzed as well as the assay used. You should also consider the long-term availability of critical reagents, including reference materials and controls. Manufacturers may refer to several resources for a more detailed discussion of assay design strategies (e.g., Refs. 14 through 21).

잘 설계된 모든 실험과 마찬가지로, 역가 시험을 개발할 때에는 적절한 시험 대조물질을 포함하고, 가능한 경우 적절한 제품 특이적 표준물질과 비교하여야 한다. 제품 특이적 표준물질 및/또는 대조 검체를 제품과 나란히 시험하면 시험이 기대한 대로 작동하는지 확인하는 데 도움이 된다. 또한 대조물질은 설비와 시약이 정해진 한도 안에서 작동하고 있음을 확인하는 데 도움이 된다. 잘 설계된 대조 검체 세트는 결과가 의미 있고 신뢰할 만하다는 확신을 크게 높일 수 있다.

As with all well designed experiments, developing a potency assay should include appropriate assay controls and a comparison to an appropriate product-specific reference material, when available. Running a product-specific reference material and/or control samples in parallel with the product helps ensure that the assay is performing as expected. In addition, controls help establish that the equipment and reagents are working within established limits. A well designed set of control samples can substantially increase confidence that results are meaningful and reliable.

가능하면 제품 개발의 일환으로 자체 “사내(in house)” 표준물질을 개발하여야 한다(참고문헌 9~11). 여기에는 특성분석이 잘 된 임상 로트, 또는 직접 만들거나 다른 출처에서 준비한 특성분석이 잘 된 다른 물질(예: 제품과 프로파일이 비슷한, 특성분석이 잘 된 세포주)이 포함될 수 있다. 표준물질(사내 제품 특이적 표준물질/대조물질 포함)을 어떻게, 왜 개발했는지에 관한 명확한 근거가 있어야 한다. 표준물질을 개발하거나 확보할 때 CBER 심사팀과 협의할 것을 권장한다.

You should develop your own “in house” reference material(s) (Refs. 9 through 11) as part of product development when feasible. These may include well characterized clinical lots or other well characterized materials prepared by you or another resource (e.g., a well characterized cell line with a profile similar to your product). There should be a clear rationale for how and why the reference material (including in house product-specific reference material/control) was developed. We encourage you to consult with your CBER review team when developing or obtaining reference materials.

다른 표준물질과 표준품은 시험 개발에 도움이 될 수 있고, 더 타당한 사내 표준물질 및/또는 대조물질을 개발하고 적격성 평가하는 데 쓸 수 있다. 생물의약품의 특성분석 및/또는 역가 시험의 잠재적 “판독(read-out)” 시스템용으로 여러 표준물질, 표준품 및 대조물질이 이미 나와 있거나 개발 중이다. 예를 들어 설비를 교정하고 정량적 유세포분석의 허용 가능한 변수를 정하는 데 도움이 되는 형광 비드/항체와 입자 크기 표준품¹⁸ 및 지침¹⁹이 있다(참고문헌 19). 현재 아데노바이러스 5형(참고문헌 20),²⁰ 레트로바이러스²¹ 벡터, 아데노연관바이러스 2형 벡터²²의 표준물질도 나와 있다.

Other reference materials and standards can help with assay development and can be used to develop and qualify more relevant in house reference materials and/or controls. A number of reference materials, standards, and controls are available or are being developed for characterizing biologics and/or for potential “read-out” systems for potency assays. For instance, there are fluorescent bead/antibodies and particle size standards¹⁸ and guidelines¹⁹ available to help calibrate equipment and help define acceptable parameters for quantitative flow cytometry analysis (Ref. 19). Reference materials are also currently available for adenovirus type 5 (Ref. 20),²⁰ retrovirus²¹ vectors and adeno-associated virus type 2 vectors²².

렌티바이러스 벡터용 표준물질과 대조물질도 보고되어 있다(참고문헌 21). 다른 CGT 제품용 범용 또는 표준화된 표준물질의 개발을 권장한다.

Standard materials and controls for lentivirus vectors have also been described (Ref. 21). Development of universal or standardized reference materials for other CGT products is encouraged.

사내 표준물질은 제품 개발과 특성분석의 여러 단계에서 사용하게 되므로, 표준물질을 제품 안정성시험과 나란히 안정성시험에 부치고 적절한 재시험일 또는 사용기한을 부여하여야 한다(참고문헌 4). 더욱이 표준물질의 새 배치마다 적절히 특성분석하여 원래 표준물질과 비교하고, 새 표준물질을 적격성 평가하고 궁극적으로 밸리데이션하는 적절한 절차를 마련하여야 한다. 가능하면 새로 제조한 표준물질과 비교할 수 있도록 사내 표준물질 각 로트의 검체를 보존²³하고(참고문헌 3, 4, 8), 표준물질의 소진이나 사용기한 만료에 미리 대비하여야 한다. 일상 시험 중 표준물질의 지속적인 성능과 안정성을 추적하는 통계적 관리도(control chart)는 부정적 경향을 조기에 발견할 수 있게 해 주는 유용한 품질관리 도구가 될 수 있다.

Because you will use in house reference materials at various stages of product development and characterization, you should subject reference materials to stability studies in parallel with your product stability studies and assign appropriate retest or expiration dates (Ref. 4). Moreover, you should appropriately characterize each new batch of reference material, compare it with the original, and establish appropriate procedures to qualify and eventually validate new reference materials. When possible, you should retain²³ samples (Refs. 3, 4 and 8) of each lot of in house reference material for comparison with newly manufactured reference material and prepare in advance for depletion or expiration of reference materials. The use of statistical control charts to map the ongoing performance and stability of reference material during routine assays can be a useful quality control tool allowing for early detection of adverse trends.

생물의약품 허가를 받으려면, 무엇보다도 제품이 정해진 역가 요건을 충족함을 입증하는 자료를 BLA에 제출하여야 하며(21 CFR 601.2), 이를 위해서는 역가 시험을 밸리데이션하여야 한다(21 CFR 211.165(e) 참조). 밸리데이션 과정은 시험방법 안의 잠재적 오차 요인을 찾아내고 정량한다. 시험 개발 중에는 시험 성능과 사용 적합성을 평가하여야 한다. 분석법 밸리데이션에 관해서는 많은 자료가 있다(참고문헌 9~11). 다음을 포함하여 관련된 모든 시험 변수를 분석하고 밸리데이션하여야 한다(참고문헌 9~11).

To obtain a biologics license, you must submit data in your BLA demonstrating, among other things, that your product meets prescribed requirements of potency (21 CFR 601.2), which requires that you validate your potency assay (see 21 CFR 211.165(e)). The validation process identifies potential sources of error and quantifies them within the assay method. During assay development, you should evaluate assay performance and suitability for use. Numerous resources are available for analytical methods validation (Refs. 9 through 11). You should perform analysis and validation of all relevant assay parameters (Refs. 9 through 11), including:

역가 측정을 위한 실험실 실험의 설계와 분석에 타당하고 적절한 통계 방법을 적용하는 것은 매우 중요하다. 그렇지 않으면 그러한 실험 자료에서 이끌어 낸 추론이 타당하지 않을 수 있다. 결과를 보고할 때에는 시험 변동성의 잠재적 요인과 반복 측정 간 변동을 고려하여야 한다. 분석 방법을 그 타당성과 근거를 포함하여 충분히 기술하여야 한다. 이 기술은 시험 보고서에 제시한 결과를 독립적으로 통계 분석하고 평가할 수 있을 만큼 명확하여야 한다. CBER 심사 위원회의 통계 평가를 돕기 위해 역가 시험 밸리데이션에서 수집한 자료를 전자 형식으로 제출할 수 있지만, 현재 전자 형식 자료 제출이 요건은 아니다. 밸리데이션 결과는 목표로 한 밸리데이션 변수와 그 허용기준 적합 여부를 다루어야 한다(참고문헌 9~11).

It is critically important to apply sound and appropriate statistical methods to the design and analysis of laboratory experiments for potency measurements. Otherwise, inferences drawn from such experimental data might not be valid. Potential sources of assay variability and variations from replicates should be taken into account when reporting results. You should fully describe your methods of analysis, including your justification and rationale. These descriptions should be sufficiently clear to permit independent statistical analysis and evaluation of the results presented in the study reports. You may provide data collected from potency assay validation studies in electronic format to facilitate statistical evaluations by the CBER review committee, but supplying data in an electronic format is not currently a requirement. The results of validation studies should address the targeted validation parameters and their conformance to acceptance criteria. (Refs. 9 through 11).

정해진 기준 및 표준에 적합함을 보증하는 데 필요한 모든 시험에서 얻은 완전한 자료를 포함하는 실험실 기록을 유지하여야 한다(21 CFR 211.194). 역가 실험의 설계, 자료 형식 및 분석에 관한 의견을 받을 수 있도록 심사팀과 일찍 논의를 시작할 것을 권장한다.

You must maintain laboratory records that include complete data derived from all tests necessary to assure compliance with established specifications and standards (21 CFR 211.194). We encourage you to initiate early discussions with the review team to receive feedback on the design, data format and analysis of potency experiments.

III.B.3항에서 다루었듯이, 적합한 상관관계 시험을 수행한다면 역가 평가를 위한 시험 매트릭스의 일부로 정성 시험을 쓸 수 있다. 정성 시험과 관련된 모든 변수를 밸리데이션하고, 관련이 없다고 판단한 변수에 대해서는 근거를 제시하여야 한다. 예를 들어 적합/부적합으로 판독하는 정성 시험에는 일부 밸리데이션 변수(예: 직선성)가 적용되지 않을 수 있지만, 특이성과 그 밖의 허용 가능한 성능 특성(예: 완건성, 시스템 적합성)을 확인하는 데에는 적절한 대조 검체를 사용하여야 한다.

As discussed in Section III.B.3, qualitative assays may be used as part of an assay matrix to assess potency, provided that you conduct suitable correlation studies. You should validate all parameters relevant to your qualitative assay and provide a rationale for those parameters that you determine are not relevant. For example, although certain assay validation parameters (e.g., linearity) may not be applicable to a qualitative assay with a pass or fail readout, appropriate control samples should be used to characterize the assay for specificity as well as for other features of acceptable performance (e.g., robustness, system suitability).

정량 자료가 없으면 정확성과 정밀성을 입증하기 어려울 수 있지만, 시험을 적절히 설계하면(예: 충분한 반복 수) 시험의 일관성을 충분히 입증할 수 있을 것이다. 반정량 시험(정량 판독값의 변동이 큰 시험, 예: 동물 모델에서의 반응)은 시험의 완건성과 일관성을 판단할 때 더 넓은 허용 범위를 고려할 수 있다. 각 시험의 적합 여부를 판정할 수 있도록 정성 시험의 대조물질 및/또는 표준물질에 대한 허용기준을 정하여야 한다. 개별 시험 가운데 여러 번 대조물질이 부적합하면 그 시험은 허용 가능한 것으로 보지 않는다. 아울러 CGT 제품은 복잡하므로 시험 적합성을 판단하는 구체적 상황은 시험마다 다르다. 따라서 구체적인 시험 설계 및/또는 역가 측정의 상세한 실험 분석을 시작하기 전에 계획한 실험을 CBER 심사팀과 논의할 것을 권장한다.

Without quantitative data, demonstrating accuracy and precision could be challenging; however, with proper assay design (e.g., sufficient replicates), you should be able to demonstrate adequate assay consistency. For semi-quantitative assays (assays with highly variable quantitative readout, e.g., response in an animal model), broader acceptance ranges may be considered for determining assay robustness and assay consistency. You should establish acceptance criteria for the control and/or reference material in your qualitative assay to determine if each assay is acceptable. If the controls fail in many of the individual assays the assay would not be considered acceptable. Additionally, because of the complex nature of CGT products, specific circumstances for determining assay suitability will vary from assay to assay. Therefore, we encourage you to discuss planned experiments with your CBER review team before you initiate specific assay designs and/or detailed experimental analyses of potency measurements.

이 가이던스에서 보듯이, 제품에 적합한 역가 측정 방법을 개발하려면 상당한 양의 자료가 필요할 수 있다(참고문헌 15도 참조). 또한 시험은 제품을 개발하면서 얻는 새로운 정보에 따라 시간이 지나며 바뀔 수 있다. 따라서 역가 측정 방법을 설계·평가·밸리데이션하는 과정에서 CBER 심사팀과 적시에 논의할 것을 권고한다.

As this guidance indicates, a considerable amount of data might be necessary to develop a suitable measurement of potency for your product (see also Ref. 15). In addition, your assay(s) might change over time in response to new information obtained as you develop your product. Therefore, we recommend that you have timely discussions with your CBER review team as you design, evaluate and validate your potency measurement.