이 가이던스 문서는 체세포치료제와 유전자치료제의 개발과 규제에 관한 FDA의 현재 견해를 나타낸다. 이 가이던스는 누구에게도 어떠한 권리를 만들거나 부여하지 않으며, FDA나 일반 대중을 구속하지 않는다. 적용 법률이나 규정, 또는 둘 다의 요건을 충족한다면 다른 접근 방법을 사용할 수 있다.

This guidance document represents the Agency’s current thinking on the development and regulation of somatic cell therapy and gene therapy products. It does not create or confer any rights for or on any person and does not operate to bind FDA or the public. An alternative approach may be used if such approach satisfies the requirements of applicable statutes, regulations, or both.

1991년 「사람 체세포치료 및 유전자치료에 관한 고려사항(Points to Consider, PTC)」이 발행된 이후, 유전자치료 제안의 범위는 추가적인 벡터 부류와, 환자에게 벡터를 직접 투여하는 생체내 벡터 사용까지 넓어졌다. 이 가이던스 문서는 1991년 PTC를 갱신·대체하며, 유전자치료용 재조합 벡터의 생산, 품질관리 시험 및 투여와, 세포치료제 및 벡터 모두의 비임상 시험에 관한 규제상 관심사의 최신 정보를 제조업자에게 제공하기 위한 새로운 내용을 담고 있다. 이 가이던스는 규정이 아니며, 생물의약품평가연구센터(CBER) 직원이 현 시점에서 고려하여야 한다고 보는 사안을 나타낸다.

Since the issuance of the "Points to Consider (PTC) in Human Somatic Cell Therapy and Gene Therapy" in 1991, the range of gene therapy proposals has expanded to include additional classes of vectors and use of vectors in vivo via direct vector administration to patients. This guidance document updates and replaces the 1991 PTC with new information intended to provide manufacturers with current information regarding regulatory concerns for production, quality control testing, and administration of recombinant vectors for gene therapy; and of preclinical testing of both cellular therapies and vectors. These guidances are not regulations, but rather represent issues that the Center for Biologics Evaluation and Research (CBER) staff believes should be considered at this time.

예방 백신으로 사용하는 바이러스 또는 DNA 제제는 사안이 일부 겹치기는 하지만 이 문서의 대상이 아니다. 감염병 예방용 플라스미드 제품 사용에 관한 별도 가이던스는 CBER 백신연구심사실(Office of Vaccines Research and Review)(301-594-2090)에서 받을 수 있다. 관련 문서 하나는 「감염병 예방 적응증 플라스미드 DNA 백신에 관한 고려사항(1996년 12월)」(61 FR 68269)이다. 체세포치료제는 계속 바뀌고 있는 감염병 시험 기준의 영향을 받는다. 추가 지침은 다음 문서를 참조한다.

Virus or DNA preparations used as preventive vaccines are not covered by this document, though there is some overlap in the issues. Separate guidance on use of plasmid products to prevent infectious diseases is available from the Office of Vaccines Research and Review, CBER (301) 594-2090. One pertinent document is the "Points to Consider on Plasmid DNA Vaccines for Preventive Infectious Disease Indications (December, 1996)", (61 FR 68269). Somatic cell therapies are affected by the evolving criteria for infectious disease testing. For additional guidance refer to the following documents:

최근 체세포를 생체외에서 조작한 뒤 사람에게 다시 넣는 다양한 혁신적 치료법이 사용되거나 제안되었다. 체세포치료란 생체외에서 조작되거나 가공된 자가, 동종 또는 이종의 살아 있는 세포를 사람에게 투여하는 것이다. 체세포치료용 제품의 제조에는 세포의 생체외 증식, 확장, 선별(「세포 및 조직 기반 제품의 규제에 관한 제안 접근 방법」, 1997. 2. 28.(62 FR 9721) 참조) 또는 약리학적 처리, 그 밖의 생물학적 특성 변경이 포함된다. 이러한 세포 제품은 진단 또는 예방 목적으로도 사용될 수 있다. 제조업자는 정책과 규정을 검토하여 특정 체세포치료제 또는 유전자치료제가 어떻게 규제되는지 판단하여야 한다.

Recently, various innovative therapies involving the ex vivo manipulation and subsequent reintroduction of somatic cells into humans have been used or proposed. Somatic cell therapy is the administration to humans of autologous, allogeneic, or xenogeneic living cells which have been manipulated or processed ex vivo. Manufacture of products for somatic cell therapy involves the ex vivo propagation, expansion, selection (see: “A Proposed Approach to the Regulation of Cellular and Tissue-based Products”, Feb. 28, 1997, (62 FR 9721)), or pharmacologic treatment of cells, or other alteration of their biological characteristics. Such cellular products might also be used for diagnostic or preventive purposes. Manufacturers should review policy and regulations to determine how a particular somatic cell therapy or gene therapy product is regulated.

최근 체세포를 사람에게 넣는 다양한 혁신적 치료법이 사용되거나 제안되었다. 이 가이던스에서 체세포치료라는 용어는 수혈용 혈액 제품을 제외한, 자가, 동종 또는 이종의 살아 있는 비생식계열 세포를 치료, 진단 또는 예방 목적으로 사람에게 투여하는 것을 말한다.

Recently, various innovative therapies involving the introduction of somatic cells into humans have been used or proposed. For the purpose of this Guidance, the term somatic cell therapy refers to the administration to humans of autologous, allogeneic, or xenogeneic living non-germline cells, other than transfusable blood products, for therapeutic, diagnostic, or preventive purposes.

유전자치료는 살아 있는 세포의 유전물질 변형에 근거한 의학적 중재이다. 세포는 이후 사람에게 투여하기 위해 생체외에서 변형되거나, 대상자에게 직접 투여하는 유전자치료에 의해 생체내에서 변경될 수 있다. 유전적 조작을 생체외에서 세포에 수행한 뒤 그 세포를 환자에게 투여하는 경우, 이것도 체세포치료의 한 형태이다. 유전적 조작은 치료 또는 예방 효과를 목적으로 하거나, 나중에 식별하기 위해 세포를 표지하는 방법이 될 수 있다. 이러한 치료를 위해 유전물질을 전달하는 데 사용하는 재조합 DNA 물질은 유전자치료의 구성 요소로 보며, 따라서 규제 감독 대상이다.

Gene therapy is a medical intervention based on modification of the genetic material of living cells. Cells may be modified ex vivo for subsequent administration to humans, or may be altered in vivo by gene therapy given directly to the subject. When the genetic manipulation is performed ex vivo on cells which are then administered to the patient, this is also a form of somatic cell therapy. The genetic manipulation may be intended to have a therapeutic or prophylactic effect, or may provide a way of marking cells for later identification. Recombinant DNA materials used to transfer genetic material for such therapy are considered components of gene therapy and as such are subject to regulatory oversight.

이 문서는 생식세포 변형을 목적으로 하는 유전적 조작은 다루지 않는다.

This document does not discuss genetic manipulation aimed at the modification of germ cells.

체세포치료의 예로는 효소, 사이토카인 또는 응고인자 같은 분자 종의 생체내 공급원으로서 세포를 이식하는 것, 림포카인 활성화 살해세포(lymphokine activated killer cell)와 종양침윤림프구 같은 활성화 림프계 세포를 주입하는 것(별도의 고려사항 문서에서 다룬다. 아래 참조), 그리고 간세포, 근모세포 또는 췌장 소도세포처럼 복잡한 생물학적 기능을 수행하도록 의도된 조작 세포 집단을 이식하는 것이 있다.

Examples of somatic cell therapies include implantation of cells as an in vivo source of a molecular species such as an enzyme, cytokine or coagulation factor; infusion of activated lymphoid cells such as lymphokine activated killer cells and tumor-infiltrating lymphocytes (addressed in a separate Points to Consider document: see below); and implantation of manipulated cell populations, such as hepatocytes, myoblasts, or pancreatic islet cells, intended to perform a complex biological function.

초기의 유전자치료 접근 방법은 체세포를 변경하여 투여하는 것이었다. 그러나 레트로바이러스 벡터나 그 밖의 형태의 유전물질을 환자에게 직접 투여하는 것과 같은 추가 접근 방법도 사용되어 왔다. 아래에 기술한 우려 사항은 사용한 방법과 관계없이 적용되지만, 적용할 시험은 다를 수 있다.

Initial approaches to gene therapy have involved the alteration and administration of somatic cells. However, additional approaches such as the direct administration to patients of retroviral vectors or other forms of genetic material have been used. The concerns described below apply regardless of the method used, though the applicable tests may be different.

치료 목적의 세포는 여러 방법으로 전달될 수 있다. 예를 들어 주입하거나, 여러 부위에 주사하거나, 응집된 형태로 또는 고형 지지체나 캡슐화 물질과 함께 수술로 이식할 수 있다. 세포에 더하여 사용하는 매트릭스, 섬유, 비드 또는 그 밖의 물질은 첨가제, 추가 유효성분 또는 의료기기로 분류될 수 있다.

Cells for therapeutic purposes may be delivered in various ways. For example, they may be infused, injected at various sites or surgically implanted in aggregated form or along with solid supports or encapsulating materials. Any matrices, fibers, beads, or other materials which are used in addition to the cells may be categorized as excipients, additional active components, or medical devices.

세포 및 다른 구성 성분과의 잠재적 상호작용이 복잡하므로, 비임상 평가를 위해서는 추가 구성 요소를 최종 생물의약품의 일부로 고려하여야 한다.

Because of the complexities of potential interactions with the cells and other constituents, additional components should be considered as part of the final biological product for purposes of preclinical evaluation.

모든 유전자치료제와 대부분의 체세포치료제는 FDA가 규제한다. 「세포 및 조직 기반 제품의 규제에 관한 제안 접근 방법」, 1997년 2월 28일(62 FR 9721)과 이 분야에서 이후 발행된 규정 및 정책을 참조한다.

All gene therapy products and most somatic cell therapy products are regulated by the FDA. See “A Proposed Approach to the Regulation of Cellular and Tissue-Based Products,” February 28, 1997, (62 FR 9721) as well as subsequent regulations and policy issued in this area.

체세포치료제와 유전자치료제의 임상시험계획(IND) 신청은 21 CFR 312.23에 기술된 대로 다른 임상시험용 생물의약품의 IND와 같은 형식을 따르고 같은 항을 포함하여야 한다. 서식과 가이던스 문서는 이 문서 끝에 적힌 대로 전화, 팩스 또는 이메일로 CBER에서 받을 수 있다. 요구되는 구체적인 정보는 실험 체계와 시험 단계에 따라 달라진다. 환자 선정 기준에 유전자 검사 결과가 포함되는 치료법의 경우, 그 검사 방법을 문서화하고 밸리데이션한 정보를 IND에 제출하여야 한다.

IND applications for somatic cell and gene therapies should follow the same format and contain the same sections as IND's for any investigational biological product, as described in 21 CFR 312.23. Forms and guidance documents are available from CBER by phone, FAX or E-mail as listed at the end of this document. The particular information required will depend upon the experimental system and the phase of study. For those therapies for which patient entry criteria include results of a genetic test, information should be submitted to the IND documenting and validating the test method.

생물의약품은 완전히 규명할 수 없는 복잡한 혼합물인 경우가 많다. 최종 제품뿐 아니라 제조공정의 품질관리도 필요하다. 생산 공정 관리가 미흡하면 외래성 인자나 그 밖의 오염물질이 유입되거나, 최종 제품 시험으로는 검출되지 않을 수 있는 생물의약품의 특성 또는 안정성의 의도하지 않은 변화가 생길 수 있다. 이러한 이유로 생산 공정에 관련된 방법과 시약을 규정하여야 한다. 또한 세포은행과 생산 공정의 주요 중간체는 품질관리 대상이어야 한다. 최종 제품과, 벡터 함유 상등액 같은 핵심 물질 모두의 로트 간 재현성을 검토하여야 한다. 기존 일반 규정(21 CFR 210, 211, 312, 600)이 관련될 수 있으므로 지침으로 참고하여야 한다.

Biological products are often complex mixtures that cannot be completely defined. Quality control of the manufacturing process as well as the final product is necessary. Poor control of production processes can lead to the introduction of adventitious agents or other contaminants, or to inadvertent changes in the properties or stability of the biological product that may not be detectable in final product testing. For these reasons, the methods and reagents involved in the production process should be defined. Also, cell banks and key intermediates in the production process should be subject to quality control. Lot-to-lot reproducibility of both the final product and of critical materials such as vector-containing supernatants should be examined. Existing general regulations (21 CFR 210, 211, 312, and 600) may be relevant and should be consulted for guidance.

체세포치료제와 유전자치료제의 탐색적 제1상 임상시험은 합리적인 안전성과 타당성을 보증하는 자료에 근거하여야 한다. 특히 중증 또는 생명을 위협하는 질환의 경우, 탐색적 임상시험 개시를 뒷받침하기 위해 제출하는 자료는 제품 개발 후기 단계에서 제출하는 자료보다 적을 수 있다. 제1상 임상시험 개시를 뒷받침하는 자료의 심사는 안전성에 중점을 두지만, 타당성도 어느 정도 입증하여야 한다.

Exploratory phase I trials for somatic cell and gene therapy products should be based on data that assure reasonable safety and rationale. Less data may be submitted to support beginning exploratory trials than may be submitted at later stages of product development, especially in the case of severe or life-threatening diseases. The review of data to support initiation of phase I trials focuses on safety, although some demonstration of rationale should also be provided.

제품 개발 후기 단계에서는 추가 제품 시험 자료가 있어야 한다. 생체내 생물학적 활성을 반영하는 정량적 역가 시험법을 개발하고, 제품의 완전성을 보증하기 위해 제품 안정성을 연구하여야 한다. 품목허가를 받으려면 안전성에 더하여 임상적 유효성의 근거가 요구된다.

Data from further product testing should be available at later stages of product development. A quantitative potency assay reflective of bioactivity in vivo should be developed and product stability should be studied to assure product integrity. In addition to safety, evidence of clinical efficacy is required for licensure.

제품 개발 중 제형이 변경되면, 생물학적 역가의 정량 시험과, 적절한 경우 비임상 안전성 평가로 서로 다른 제형을 비교하여야 한다. 후기 임상시험에 사용한 제품이 초기 임상시험에 사용한 제품과 크게 다르고 초기 임상시험 결과가 최종 제품 평가에 필수적인 경우, 제품의 동등성(comparability)을 입증하거나 의뢰자가 초기 임상시험을 반복할 필요가 있는지 평가하여야 한다(「치료용 생명공학 유래 제품을 포함한 사람용 생물의약품의 동등성 입증에 관한 FDA 가이던스」, 1996. 4. 26.(61 FR 10426) 참조).

If product formulation is changed during product development, a comparison of the different formulations should be made by quantitative assays of biological potency and, when appropriate, preclinical safety evaluation. If the product used in later phase trials differs in major ways from that used during earlier trials and if the results of the earlier trials are essential to the final product evaluation, product comparability should be demonstrated or the sponsor should assess whether earlier trials may need to be repeated (see: "FDA Guidance Concerning Demonstration of Comparability of Human Biological Products, Including Therapeutic Biotechnology-derived Products", 4/26/96, (61 FR 10426)).

여러 IND에 사용할 벡터는 제출 절차를 간소화하기 위해 제조 정보를 마스터 파일로 제출할 수 있다. 마스터 파일이나 그것이 기술하는 제품은 "승인"되거나 "불승인"되지 않는다. 마스터 파일은 IND를 보충하는 정보와 자료를 담는다. 같은 제품을 서로 다른 환자군에 사용하면 다른 사안이 생기거나 허용 가능한 위험 수준이 달라질 수 있지만, 마스터 파일을 사용하면 공통 사안을 파악하고 효율적으로 해결하는 데 도움이 된다. 여러 IND 의뢰자가 마스터 파일을 상호 참조하도록 허가받을 수 있으므로, 중복 제출을 줄이면서 원하는 기밀성도 유지할 수 있다.

For vectors intended to be used in a number of different IND's, manufacturing information can be submitted in a master file to simplify the filing process. Neither a master file nor the product it describes is "approved" or "disapproved". Rather the master file contains information and data that supplement the IND. Use of the same product for different patient populations may raise different issues or may indicate different levels of acceptable risk, but use of the master file can help identify common issues and facilitate their efficient resolution. Multiple IND sponsors can be authorized to cross-reference a master file, thus reducing redundant submissions as well as retaining desired confidentiality.

세포치료제와 유전자치료제에 관한 사안 중 일부는 다른 고려사항 문서에서 논의한 사안과 겹친다. 고려사항 문서나 그 밖의 가이던스 문서의 최신판을 검토할 것을 제안한다. 다른 가이던스 문서도 적절히 참고하여야 하며, 예를 들면 다음과 같다.

Some of the issues regarding cellular and gene therapy products overlap with those discussed in other Points to Consider documents. It is suggested that the most recent versions of Points to Consider or other Guidance documents be reviewed. Other Guidance documents should be consulted as is appropriate, for example:

다음 항들은 이러한 제품의 제조업자가 신청서를 제출할 때 다루어야 할 관심 분야와 질문을 제시한다. 초기 임상시험에 앞서 합리적 수준의 안전성을 보증하기에 충분한 자료를 제출하여야 한다. 사용한 방법의 기술, 적절한 시험의 실제 자료, 시험법 밸리데이션의 근거를 포함하여야 한다.

The following sections indicate areas of concern and questions to be addressed by manufacturers of such products when filing applications. Initial clinical trials should be preceded by submission of data adequate to assure a reasonable degree of safety. A description of the methods used, actual data from appropriate tests, and evidence of assay validation should be included.

특정 체계에 대해 아래에서 논의하는 사안을 모두 다루는 것은 현실적이지 않거나 불가능할 수 있다. 경우에 따라 언급된 시험이 적용되지 않거나 부적절할 수 있고, 다른 절차가 더 적절할 수도 있다. 언급된 방법과 절차는 제안일 뿐이며, 의뢰자는 다른 기법을 제안할 수 있고, 그 기법이 이러한 사안을 적절히 다루고 자료와 근거로 뒷받침된다면 수용될 것이다. 또한 아래에서 논의하는 정보가 모두 임상시험 개시 전에 필요한 것은 아닐 수 있다. 의뢰자는 CBER 직원과 상의할 것을 권장한다.

It may not be practical or possible to address all of the issues discussed below for a given system. In some instances, tests mentioned will be inapplicable or inappropriate, or alternative procedures may be more appropriate. The methods and procedures mentioned are suggestions: sponsors may propose alternative techniques which will be acceptable if these issues are adequately addressed and supported by data and rationale. In addition, all of the information discussed below may not be necessary before clinical trials are initiated. Sponsors are encouraged to consult with CBER staff for discussion.

이 문서에서 제시한 지침은 부분적으로 세포치료제와 유전자치료제 및 그 생산 방법에 관해 축적된 경험의 평가에 근거한다. 절차는 시간이 지나면서 수정될 것이며, 다른 관리 절차가 필요하게 될 것이다. 여기에 담은 원칙은 이러한 절차를 개발하는 지침이 될 수 있다.

The guidance suggested in this document is based in part on an assessment of the available experience with cell and gene therapy products and methods of production. Modifications of procedures will occur with time, and alternate control procedures will be needed. The principles included here can serve as guidance for developing these procedures.

다음 정보를 제출하여야 한다.

The following information should be provided:

사용할 세포의 종류는 그 기원에 따라 자가, 동종 또는 이종으로 분류하여야 한다. 조직 공급원과 그 밖의 관련 식별 정보를 제출하여야 한다.

The type(s) of cell to be used should be classified as autologous, allogeneic, or xenogeneic in origin. The tissue source and other relevant identifying information should be provided.

나이와 성별을 포함하여 공여자의 관련 특성을 명시하여야 한다. 「사람 투여용 생체외 활성화 단핵 백혈구의 채취, 가공 및 시험에 관한 고려사항」에 명시된 대로, 동종 공여자는 최소한 헌혈자 기준(21 CFR 640.3)을 충족하여야 하고, 시험 및 적격 판정 절차를 기술하여야 하며, 모든 일탈은 타당성을 입증하여야 한다. 해당되는 경우 장기 및 조직 공여자에 관한 공중보건국(PHS)의 추가 권고를 반영하여야 한다. 제외 기준은 HIV-1과 HIV-2, B형 및 C형 간염 바이러스, HTLV-1, 그 밖의 감염성 인자에 의한 감염의 존재 또는 가능성에 중점을 두어야 한다. 공여자에게서 얻을 혈청학적, 진단적, 임상 병력 자료를 명시하여야 한다.

Any relevant characteristics of the donor(s) should be specified, including age and sex. As stated in the "Points to Consider in the Collection, Processing, and Testing of Ex-Vivo-Activated Mononuclear Leukocytes for Administration to Humans," as a minimum, allogeneic donors should meet the standards for blood donors (21 CFR 640.3), the testing and acceptance procedures should be described, and any deviations should be justified. Where applicable, additional Public Health Service recommendations regarding organ and tissue donors should be incorporated. Exclusion criteria should focus on the presence or likelihood of infection by HIV-1 and HIV-2, hepatitis B and C viruses, HTLV-1, and other infectious agents. Serological, diagnostic, and clinical history data to be obtained from donors should be specified.

경우에 따라 공여자 추적 관찰 규정을 두는 것이 적절하며, 공여자 자료를 얻는 방법과 기록 관리를 상세히 기술하여야 한다.

Provision for follow-up of donors will be appropriate in some cases and methods of obtaining donor data and record keeping should be thoroughly described.

자가 세포를 사용하는 경우, 외래성 인자 시험과 표시기재에 관한 추가 지침은 「세포 및 조직 기반 제품의 규제에 관한 제안 접근 방법」, 1997년 2월 28일(62 FR 9721)을 참조한다. 사람 이외의 동물 종을 사용하는 경우, 무리 또는 집단의 기원, 관련 유전 형질, 사육 관리 및 건강 상태를 기술하여야 한다(「이종이식의 감염병 사안에 관한 PHS 지침」, 1996년 8월, 61 FR 49920 및 1997년 1월(62 FR 3563)도 참조).

If autologous cells are used, please refer to “A Proposed Approach to the Regulation of Cellular and Tissue-based Products”, February 28, 1997, (62 FR 9721) for additional guidance on adventitious agent testing and labeling. If animal species other than humans are used, a description should be provided of the origin, relevant genetic traits, husbandry, and health status of the herd or colony (see also "PHS Guidelines on Infectious Disease Issues in Xenotransplantation", August, 1996, 61 FR 49920 and January, 1997, (62 FR 3563).

동종 공여자를 사용할 경우, 적절하면 혈액형 같은 다형성에 대한 형 검사를 포함하여야 한다. 공여자와 수혜자 사이의 조직적합성 항원(HLA 클래스 I 및/또는 II, 경우에 따라 부조직적합성 항원) 일치의 중요성을 다루고, 형 검사 절차와 허용기준을 제출하여야 한다.

If allogeneic donors are to be used, typing for polymorphisms such as blood type should be included when appropriate. The importance of matching for histocompatibility antigens (HLA class I and/or II, and perhaps minor antigens in some cases) between donor and recipient should be addressed, and typing procedures and acceptance criteria provided.

여러 공여자의 세포 혼합물을 사용하는 것이 적절하거나 필요한 경우, 세포의 성능을 바꿀 수 있는 면역반응이나 그 밖의 변화를 일으킬 수 있는 세포 간 상호작용에 특별히 주의하여야 한다. 여러 공여자 세포 혼합물의 특성분석은 어려울 수 있다. 여러 공여자 세포 혼합물 제품은 「세포 및 조직 기반 제품의 규제에 관한 제안 접근 방법」, 1997년 2월 28일(62 FR 9721)에 제시된, 공중보건서비스법(PHS법) 361조에 따른 사람 세포 또는 조직 기반 제품으로 규제받기 위한 기준을 충족하지 못한다. 이러한 제품은 연방 식품의약품화장품법(FD&C법)과 PHS법 351조에 따른 규제 대상이 된다.

Should it be indicated or necessary to use mixtures of cells from multiple donors, special attention should be paid to possible cell interactions that could result in immune responses or other changes that might alter the performance of the cells. Characterization of multiple-donor cell mixtures may be problematic. Multiple-donor cell mixture products would not meet the criteria set forth in the “Proposed Approach to the Regulation of Cellular and Tissue-based Products”, February 28, 1997, (62 FR 9721) for regulation as human cellular or tissue-based products under section 361 of the Public Health Service Act (the PHS Act). Such products would be subject to regulation under the Federal Food, Drug, and Cosmetic Act and section 351 of the PHS Act.

시설의 위치와 사용하는 기구 또는 물질을 포함한 세포 채취 절차를 제출하여야 한다.

The procedures for the collection of cells, including the location of the facility, and any devices or materials used, should be submitted.

일반적으로 세포 배양 작업은 원자재의 품질, 제조 관리, 설비 밸리데이션 및 모니터링 측면에서 신중하게 관리하여야 한다. I항 C, 일반 고려사항을 참조한다.

In general, cell culture operations should be carefully managed in terms of quality of materials, manufacturing controls, and equipment validation and monitoring. See I, C, General Considerations.

모든 배지와 구성 성분에 대해 허용기준을 설정하여야 하며, 여기에는 혈청 첨가물과 성장인자의 밸리데이션 및 외래성 인자 부재 확인이 포함된다. 배양 배지에 사용한 구성 성분을 그 공급원과 로트 번호를 포함하여 상세히 기록하여야 한다. 일부 동물 혈청, 특정 단백질, 혈액형 물질처럼 감작을 일으킬 가능성이 있는 배지 구성 성분은 피하여야 한다. 성장인자는 세포 배양 특성의 재현성을 보증하기 위해 확인, 순도, 역가의 척도를 설정하여야 한다. 배지 구성 성분과 배양에 첨가하는 생물학적 물질의 기준에 관한 더 상세한 논의는 「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항(1993)」과 「사람 투여용 생체외 활성화 단핵 백혈구의 채취, 가공 및 시험에 관한 고려사항(1989)」에 있다.

Acceptance criteria should be established for all media and components, including validation of serum additives and growth factors, as well as verification of freedom from adventitious agents. Records should be kept detailing the components used in the culture media, including their sources and lot numbers. Medium components which have the potential to cause sensitization, for example certain animal sera, selected proteins, and blood group substances, should be avoided. For growth factors, measures of identity, purity, and potency should be established to assure the reproducibility of cell culture characteristics. More detailed discussions of specifications for medium components and biologicals added to cultures are presented in the "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993)" and the "Points to Consider in the Collection, Processing, and Testing of Ex-Vivo-activated Mononuclear Leukocytes for Administration to Humans (1989)."

「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항」에 명시된 대로, 환자에게 중대한 과민반응이 생길 위험이 있으므로 생산 중에는 페니실린과 그 밖의 베타-락탐계 항생제를 피할 것이 권장된다.

As stated in the "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals," it is recommended that penicillin and other beta-lactam antibiotics be avoided during production, due to the risk of serious hypersensitivity reactions in patients.

세포를 외래성 인자 오염을 최소화하도록 설계된 조건에서 취급·증식하고 실험 절차를 거친다는 것을 문서로 제출하여야 한다. 장기 배양 동안에는 세포의 오염 여부를 주기적으로 시험하여야 한다. 시험으로 세포에 세균, 효모, 곰팡이, 마이코플라스마 및 외래성 바이러스가 없음을 보증하여야 한다. 외래성 인자 시험에 관한 논의와 바이러스 시험 및 마이코플라스마 시험의 세부 사항은 「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항」(1993)을 참고하여야 한다.

Documentation should be provided that cells are handled, propagated, and subjected to laboratory procedures under conditions designed to minimize contamination with adventitious agents. During long term culturing, cells should be tested periodically for contamination. Testing should ensure that cells are free of bacteria, yeast, mold, mycoplasma, and adventitious viruses. For a discussion of adventitious agent testing and details regarding virus testing and mycoplasma testing, the "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals" (1993), should be consulted.

확인과 이질성 측면에서 세포 배양의 관리를 보증하는 제조 절차와 시험 절차를 모두 시행하여야 한다.

Both manufacturing and testing procedures should be implemented which ensure the control of cell cultures with regard to identity and heterogeneity.

세포 배양 관행과 시설은 한 세포 배양이 다른 세포 배양으로 오염되지 않도록 설계하여야 한다.

Cell culturing practices and facilities should be designed to avoid contamination of one cell culture with another.

세포 배양 중에는 세포 집단의 특성이 크게 변하거나, 처음에는 적은 수로 존재하던 다른 세포 유형이 과다 증식할 수 있다. 이러한 변화를 검출하기 위해 세포 표면 항원이나 생화학적 표지자를 모니터링하는 등의 방법으로 세포 확인을 정량적으로 평가하여야 한다. 선택한 확인 방법은 그 시설에서 사용 중인 다른 세포에 의한 오염이나 대체도 검출할 수 있어야 한다. 배양 구성의 허용 한도를 정하여야 한다. 기능적 역가의 정량 시험이 집단 표현형 분석 방법이 되는 경우도 있다. 세포를 조작할 때 원하는 기능을 모니터링하고, 원하는 형질이 유지되는지 보증하기 위해 주기적으로 시험하여야 한다. 경우에 따라 확인시험에는 공여자-수혜자 일치 확인과 면역학적 표현형 분석이 포함되어야 한다.

During cell culturing, extensive drift in the properties of a cell population, or overgrowth by a different cell type originally present in low numbers, may occur. To detect such changes, cell identity should be assessed quantitatively, for example, by monitoring cell surface antigens or biochemical markers. The method of identification chosen should also be able to detect contamination or replacement by other cells in use in the facility. Acceptable limits for culture composition should be defined. Quantitative assays of functional potency may sometimes provide a method for population phenotyping. The desired function should be monitored when the cells are subjected to manipulation, and the tests carried out periodically to assure that the desired trait is retained. Identity testing should in some cases include verification of donor-recipient matching and immunological phenotyping.

의도한 치료 효과가 세포가 합성하는 특정 분자 종에 근거한다면, 적절하고 생물학적으로 활성인 형태가 존재함을 보여 주기에 충분한 구조적·생물학적 정보를 제출하여야 한다.

If the intended therapeutic effect is based on a particular molecular species synthesized by the cells, enough structural and biological information should be provided to show that an appropriate and biologically active form is present.

배양 세포 집단의 필수 특성(적절한 경우 세포 표면 항원 같은 표현형 표지자, 기능적 특성, 생물학적 시험에서의 활성)을 정하고, 배양 기간에 따른 이 특성의 안정성을 확립하여야 한다. 이 프로파일을 사용하여 배양 기간의 한도를 정하여야 한다.

The essential characteristics of the cultured cell population (phenotypic markers such as cell surface antigens, functional properties, activity in bioassays, as appropriate) should be defined, and the stability of these characteristics established with respect to time in culture. This profile should be used to define the limits of the culture period.

세포은행 시스템은 같은 세포 공급원에서 반복 제조하는 일부 체세포치료제와, 유전자치료 벡터를 만드는 데 사용하는 패키징 세포 또는 생산세포(예: 플라스미드를 생산하는 세균 세포 또는 재조합 바이러스 벡터를 생산하는 포유류 세포)에 사용하기에 적절하다. 이러한 세포 스톡은 공식적인 세포은행 시스템(흔히 2단계 시스템)으로 관리하여야 한다. 마스터세포은행과 제조용세포은행의 확립에 관한 구체적인 지침은 「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항(1993)」, 58 FR 42974에 있다. 또한 21 CFR 610.18이 적용될 수 있다. 사용하는 세포은행 시스템을 다음과 같이 기술하여야 한다.

Cell banking systems are appropriate for use with some somatic cell therapy products that are made repeatedly from the same cell source, and with packaging or producer cells used to make gene therapy vectors, for example, bacterial cells producing a plasmid or mammalian cells producing a recombinant viral vector. These cell stocks should be handled by a formal cell banking system (often a two-tiered system). Specific guidance for the establishment of Master Cell Banks and Working Cell Banks is provided in the "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993)", 58 FR 42974. In addition, 21 CFR 610.18 may be applicable. The cell bank system used should be described as follows:

이에 관한 기술을 제출하여야 한다.

A description should be provided.

세포의 동결 및 회수 절차를 기술하여야 한다. 사용한 구성 성분(DMSO 또는 글리세롤 등)을 명시하여야 한다. 한 로트에 보존한 바이알 수와 보관 조건을 명시하여야 한다.

The procedure for freezing and for recovering the cells should be described. Components used (such as DMSO or glycerol) should be specified. The number of vials preserved in a single lot and the storage conditions should be specified.

세포의 확인은 적절한 유전형 및/또는 표현형 표지자로 확인하고, 순도의 지표로서 이러한 확인 표지자를 가진 세포 집단의 비율을 측정하여야 한다. 형질도입 세포 또는 벡터 생산세포의 경우, 제한효소 지도 작성이나 삽입 유전자가 발현하는 단백질의 생물학적 활성 시험으로 벡터 유지와 확인을 확인하여야 한다.

The identity of the cells should be confirmed by appropriate genotypic and/or phenotypic markers, and the fraction of the cell population having such identity markers measured as an indication of purity. In the case of transduced or vector-producing cells, vector retention and identity should be confirmed by restriction mapping or assay of the bioactivity of protein expressed by an inserted gene.

MCB에는 진균, 벡터 이외의 바이러스, 마이코플라스마, 의도한 세균 숙주 균주 이외의 세균, 그리고 경우에 따라 벡터 관련 증식가능 바이러스를 포함한 오염 생물학적 인자가 없음을 입증하여야 한다(VI항 B와 C 참조). 목적 플라스미드를 가진 세균으로 구성된 MCB의 경우, 박테리오파지 시험은 요구되지 않지만 박테리오파지가 안정성과 수율에 나쁜 영향을 줄 수 있으므로 그 존재 가능성을 고려하여야 한다.

MCB's should be shown to be free of contaminating biological agents, including fungi, viruses other than a vector, mycoplasma, bacteria other than an intended bacterial host strain, and replication-competent viruses related to vector in certain cases (see section VI, B and C). In the case of MCB's consisting of bacteria carrying plasmids of interest, testing for bacteriophage is not required but the possible presence of bacteriophage should be considered, since it could adversely affect stability and yield.

제품 개발 계획에는 세포가 어떤 조건에서 얼마나 오래 동결 상태로 유지되어도 해동 시 허용 가능한 활성을 유지하는지 입증하는 자료의 축적이 포함되어야 한다.

Product development plans should include accumulation of data demonstrating how long and under what conditions the cells can remain frozen and still be acceptably active when thawed.

해동 및/또는 확장 후에 생존율, 세포 확인 및 기능 시험을 반복하여야 한다. 생존 세포 수율과 정량적 기능 등가값을 동결 전 값과 비교하여야 한다. 동결 세포의 분취물을 사용하여 무균을 확인하여야 한다.

Tests of viability, cell identity, and function should be repeated after thawing and/or expansion. The yield of viable cells and of quantitative functional equivalents should be compared to those values before freezing. Sterility should be confirmed using aliquots of the frozen cells.

제조용세포은행을 사용하는 경우, 표현형 또는 유전형 표지자에 의한 확인에 대해 제한적인 시험을 거쳐야 한다. 벡터 유지와 확인은 MCB와 마찬가지로 제한효소 지도 작성이나 분비 단백질 활성 시험으로 확인하여야 한다. 또한 미생물 및 바이러스 오염이 없음을 입증하여야 한다.

Working Cell Banks, if used, should undergo limited testing for identity by phenotypic or genotypic markers. Vector retention and identity should be confirmed as in MCB's by restriction mapping or assay of secreted protein activity. They should also be shown to be free of microbial and viral contamination.

생산세포의 경우, 배양 조건에 의해 새로운 오염물질이 유도되는지 또는 벡터 완전성이 손상되는지 평가하기 위해 생산 종료 세포의 연장 배양을 1회 수행하여야 한다(「사람용 단일클론항체 제품의 제조 및 시험에 관한 고려사항」, 1997년 개정판, 62 FR 9196 참조). 의뢰자는 가장 많은 정보를 주고 가장 민감한 단계에서 시험하는 일정을 제안하여야 한다.

For producer cells, extended culture of end-of-production cells should be performed on a one-time-basis to evaluate whether new contaminants are induced by growth conditions or if vector integrity is compromised (See "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use," 1997 revision, 62 FR 9196). Sponsors should propose a schedule of testing at steps which will be most informative and sensitive.

환자 개개인의 치료를 위한 자가 세포처럼 환자마다 다르게 만드는 세포치료제에는 세포은행 관행을 적용하기 어려울 수 있다. 그러나 최종 세포 제품의 핵심 특성에 대한 시험을 고려하여야 한다.

It may not be feasible to use cell banking practices with cell therapies made differently for each patient, for example autologous cells for treatment of individual patients. However, consideration should be given to testing of the final cellular product for crucial characteristics.

시험관내 조작 절차에서 사용하는 물질(예: 항체, 사이토카인, 혈청, 단백질 A, 독소, 항생제, 그 밖의 화학물질, 또는 비드 같은 고형 지지체)은 최종 치료 제품의 안전성, 순도 및 역가에 영향을 줄 수 있다. 이러한 구성 성분은 명확히 확인하여야 하며, 각 구성 성분마다 기준을 정한 적격성 평가 프로그램을 확립하여 제조공정에 사용하기에 적합한지 판단하여야 한다. 시약 등급 물질을 사용하는 경우, 적격성 평가 프로그램에는 적절하면 그 구성 성분의 안전성, 순도 및 역가 시험이 포함되어야 한다. 임상 등급 구성 성분을 사용하는 경우에는 간소화된 시험이 적절할 수 있다. 동물 유래 물질은 경우에 따라 외래성 인자 시험이 필요하다. 해면상뇌병증을 일으키는 전염성 인자의 위험이 있는 경우 원산지를 증명하여야 한다.

Materials used during in vitro manipulation procedures, for example antibodies, cytokines, serum, protein A, toxins, antibiotics, other chemicals, or solid supports such as beads can effect the safety, purity, and potency of the final therapeutic product. These components should be clearly identified and a qualification program with set specifications should be established for each component to determine its acceptability for use during the manufacturing process. When using reagent grade material, the qualification program should include testing for safety, purity, and potency of the component where appropriate. Abbreviated testing may be appropriate for use of clinical grade components. Materials of animal origin will in some cases need to be tested for adventitious agents. The country of origin should be certified when there is risk of transmissible agents causing spongiform encephalopathy

최종 제품에 잔류할 수 있는 모든 생산 구성 성분의 농도에 대해 한도를 설정하여야 한다. 이를 제거하는 데 사용한 방법과, 제거 효과를 보여 주는 정량 시험 결과(방법과 감도의 기술 포함)를 제출하여야 한다. 일부 첨가 성분은 결합이나 흡수로 인해 세포 투여 시 측정 가능한 양으로 존재할 수 있다. 이러한 경우 동물이나 그 밖의 적절한 시스템에서 이 구성 성분의 독성을 평가하는 것을 고려하여야 한다.

Limits should be established for the concentrations of all production components that may persist in the final product. The methods used to remove them and the results of quantitative testing (including a description of methods and sensitivity) to show the effectiveness of their removal should be provided. Some added components, by virtue of binding or uptake, may be present in measurable amounts when the cells are administered. In such cases, consideration should be given to assessing toxicity of these components in animals or other appropriate systems.

유전자치료용 생체외 형질도입 세포를 포함한 세포 제품에 적용한다.

Applies to cellular products including ex vivo transduced cells for gene therapy.

투여할 최종 생물의약품뿐 아니라 생산 공정과 사용 물질도 품질관리 시험을 거쳐야 한다. 최종 제품과 생산 공정의 다른 요소에 적용할 기준을 각각의 허용 범위와 함께 명시하여야 한다.

The final biological product to be administered, as well as the production process and materials used, should be subjected to quality control testing. The specifications to be applied to the final product and to other elements of the production process, along with the range of acceptable values for each, should be specified.

생물의약품의 1개 로트는 단일 용기에서 충분히 혼합된 물질의 양으로 본다. 이 개념은 로트 시험 절차를 계획하기 위해 체세포치료와 유전자치료에도 적용할 수 있다. 즉, 이러한 치료를 위해 고유한 최종 혼합물로 조제한 각 세포 집단, 벡터 제제 또는 그 밖의 제품은 적절한 로트 출하시험을 거쳐야 한다. 개별 수혜자만을 위한 제제는 대규모 배치로 만드는 제품과 다르므로, 각 계획서의 현실적 제약에 맞는 적절한 로트 출하 기준을 선택하여야 한다. 로트 간 변동은 절차의 재현성을 나타내는 척도가 된다.

One lot of a biological product is considered to be a quantity of material that has been thoroughly mixed in a single vessel. This concept can be applied to somatic cell and gene therapy for purposes of planning lot testing procedures. This means that each cell population, vector preparation, or other product for such therapies prepared as a unique final mixture should be subjected to appropriate lot release testing. Preparations intended solely for individual recipients differ from products prepared as large batches, and appropriate lot release criteria should be chosen to fit the practical constraints of each protocol. Lot-to-lot variation provides a measure of the reproducibility of the procedures.

세포의 동일성을 확인하고 이질성을 평가하기 위하여 표현형 시험 및/또는 생화학적 시험에 의한 정량 시험을 사용하여야 한다(21 CFR 610.14).

Quantitative testing by phenotypic and/or biochemical assays should be used to confirm cell identity and assess heterogeneity (21 CFR 610.14).

알려져 있는 경우 세포의 관련 기능 및/또는 세포가 생합성하는 관련 산물을 역가의 척도로서 정의하고 정량하여야 한다(21.CFR 610.10).

The relevant function of the cells, if known, and/or relevant products biosynthesized by the cells should be defined and quantitated as a measure of potency (21.CFR 610.10).

세포의 생존율을 정량하고 허용 가능한 하한을 설정하여야 한다.

The viability of the cells should be quantitated and a lower limit for acceptability established.

시험을 통해 세포가 세균, 진균(21 CFR 610.12), 마이코플라스마(「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항」(1993) 첨부 #2, (58 FR 42974)) 및 바이러스와 같은 외래성 인자에 오염되어 있지 않음을 입증하여야 한다. FDA는 최종 세포치료제의 수명이 너무 짧아 환자에게 투여하기 전에 충분히 민감한 시험을 완료할 수 없는 경우에 마이코플라스마 비오염 제조공정의 밸리데이션을 허용하는 규칙 제정안을 검토하고 있다.

Tests should demonstrate that the cells are not contaminated with adventitious agents such as bacteria, fungi, (21 CFR 610.12), and mycoplasma, (Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals, (1993), Attachment #2, (58 FR 42974) and viruses. The agency is considering proposed rulemaking to allow for validation of a mycoplasma free manufacturing process in cases where the final cell therapy product is too short lived to complete adequately sensitive testing prior to administration to patients.

순도(21 CFR 610.13) 또는 LAL이나 그 밖의 허용 가능한 시험법에 의한 엔도톡신 시험의 밸리데이션을 확립하여야 한다. 엔도톡신 시험법의 적합성과 적절성은 사안별로 고려하여야 한다. 사용하는 시험법은 세포 제제가 엔도톡신 검출을 방해하지 않음을 보여 주도록 밸리데이션하여야 한다. 「사람 및 동물용 주사제, 생물의약품, 의료기기의 최종제품 엔도톡신 시험으로서 리물루스 아메보사이트 라이세이트 시험의 밸리데이션에 관한 지침」(1987년 12월)을 참조한다.

Purity (21 CFR 610.13) or validation of endotoxin testing by LAL or other acceptable assays should be established. The suitability and appropriateness of methods of endotoxin testing should be considered on a case-by-case basis. The test used should be validated to show that the cell preparation does not interfere with endotoxin detection. See “Guideline on validation of the limulus amebocyte lysate test as an end-product endotoxin test for human and animal parenteral drugs, biological products, and medical devices”, December, 1987.

일반 안전성 시험(21 CFR 610.11)은 최종 제품에 대해 실시하여야 한다. 적절한 경우 21 CFR 610.9에 따라 변경된 절차를 개발할 수 있다. FDA가 특히 세포치료제에 대하여 GST 규정과 적용 범위를 개정하는 규칙 제정안을 검토하고 있음에 유의한다.

The general safety test (21 CFR 610.11) must be performed on the final product. When appropriate, modified procedures may be developed according to 21 CFR 610.9. Please note that the agency is considering proposed rulemaking to amend the GST rules and scope of applicability especially for cell therapy products.

이후 투여를 위해 동결한 세포 집단을 해동하고 확장하여 환자에게 투여하는 경우, 해동 세포에 대한 로트 출하시험이 필요하며, 이는 세포은행 관행에 관한 II부 C항에서 적용하여 쓸 수 있다.

When cell populations frozen for subsequent administration are thawed, expanded, and then administered to patients, lot release testing on the thawed cells is needed, and can be adapted from Part II, C on cell banking practices.

방사성 표지 또는 독소와 같은 생체활성 물질의 사전 적재로 변형한 세포를 사용하는 치료적 또는 진단적 적용이 제안될 수 있다. 따라서 세포 이식물은 자체의 산물과 기능뿐 아니라 다른 산물에 대한 전달 시스템으로도 사용될 수 있다. 세포 이식 부위와 방사성 핵종 또는 독소의 국재화, 또는 세포의 대사 특성으로 인해 새로운 안전성 우려가 발생할 수 있다. 이러한 점은 가능한 경우 예측하고 다루어야 한다.

Therapeutic or diagnostic applications may be proposed involving cells which are modified by radiolabeling or pre-loading with bioactive materials such as toxins. Thus, the cell implant may be used as a delivery system not only for its own products and functions but also for other products. Novel safety concerns may arise related to the site of cell implantation and localization of the radionuclide or toxin, or due to metabolic properties of the cells. These should be anticipated and addressed where possible.

이와 유사한 특수 사안은 과거에 방사성 표지 항체 또는 독소 접합 항체의 사용으로 제기되었으며, 「사람용 단클론항체 제품의 제조 및 시험에 관한 고려사항」(1997)에서 다루고 있다. 체세포치료제에 대한 적용은 다를 수 있으나, 그 문서를 참조하여야 한다.

Similar special issues have been raised in the past by use of radiolabeled or toxin-conjugated antibodies, and are addressed in the "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use" (1997). Although the application to somatic cell therapies may differ, that document should be consulted.

아래에서 요구하는 정보는 일부 시스템에서는 취득하기 어려울 수 있다. 의뢰자는 대체 방법과 자료를 CBER 담당자에게 제시하여 검토를 받을 수 있다. 적절한 안전성을 보증하는 정보의 종류는 투여 경로와 투여 빈도, 의도한 환자 집단 등 제안된 임상시험의 성격에 따라 일부 달라진다.

The information requested below may be difficult to acquire in some systems. Sponsors may present alternative methods and data to CBER staff for review. The types of information which will assure adequate safety depend in part on the nature of the proposed clinical trial, such as: route and frequency of administration, and the intended patient population.

벡터 출발물질은 철저히 특성분석하고 문서화하여야 한다. 바이러스 벡터 또는 플라스미드는 클로닝되고 특성분석된 구축물로부터 제조하여야 하며, 확증적 확인시험을 거쳐야 한다. 제출하는 정보에는 최종 구축물의 제조에 사용한 벡터, 헬퍼 바이러스 및 생산 세포주의 기술을 포함한 벡터의 유래가 포함되어야 한다. 구축물 내에 포함된 프로모터나 인핸서와 같이 알려진 조절 요소를 확인하여야 한다.

Vector source materials should be characterized and documented thoroughly. Viral vectors or plasmids should be generated from cloned and characterized constructs, and subjected to confirmatory identity tests. Information supplied should include vector derivation, including descriptions of any vectors, helper viruses, and producer cell lines used for preparation of the final construct. Known regulatory elements such as promoters or enhancers contained within the construct should be identified.

제품 개발 초기에는 벡터의 적절한 부분의 염기서열 자료 및/또는 제한효소 지도와 이를 보완하는 단백질 특성분석으로 이루어진 벡터 특성분석이 허용된다. 제품 개발 후기 단계와 허가 단계에서는 보다 광범위한 염기서열 정보를 제출하여야 한다. 구축물의 크기 때문에 벡터 전체의 염기서열 분석이 가능하지 않은 경우에는, 유전자 삽입부와 측면 영역, 그리고 벡터 골격의 중요한 변형 부위 또는 분자 조작 중 변화에 취약한 것으로 알려진 부위의 염기서열을 분석하는 것으로 충분할 수 있다. 벡터와 숙주의 상호작용을 조절하는 벡터 염기서열은 알려져 있는 경우 기술하여야 하며, 숙주세포/벡터 시스템의 안정성을 고려하여야 한다.

Early in product development, vector characterization consisting of sequence data of appropriate portions of vectors and/or restriction mapping supplemented by protein characterization is acceptable. For later phases of product development and licensure, more extensive sequencing information should be provided. When sequencing of the entire vector is not feasible due to the size of the construct, it may be sufficient to sequence the genetic insert plus flanking regions and any significant modifications to the vector backbone or sites known to be vulnerable to alteration during the molecular manipulations. Vector sequences which modulate vector-host interactions should be described if known, and stability of the host cell/vector system considered.

벡터 생산 시스템은 숙주세포와, 벡터를 생산하는 데 사용하는 최종 유전자 구축물 또는 적절한 경우 벡터 중간체(예: 레트로바이러스 생산 세포)로 구성된다. 최종 유전자 구축물의 선정 절차, 유전자 구축물을 숙주세포로 전달하는 방법, 벡터 복제수를 포함한 재조합 숙주세포 클론의 선정과 특성분석, 그리고 숙주세포 내 최종 벡터 구축물의 물리적 상태(즉, 통합형 또는 염색체 외)를 상세히 기술하여야 한다. 또한 재조합 숙주세포 클론의 증식과 확장, 시드 스톡의 확립 및 시드 스톡의 적격성 평가에 관한 절차를 상세히 기술하여 제출하여야 한다. 세포은행 절차에 관한 정보는 II항 C를 참조한다.

The vector production system is composed of the host cell, final gene construct or when appropriate vector intermediate, used to produce the vector (for example, retroviral producer cell). The procedure for selection of the final gene construct, method of transfer of the gene construct into the host cell and selection and characterization of the recombinant host cell clone including vector copy number, and the physical state of the final vector construct inside the host cell (i.e. integrated or extra chromosomal), should be described in detail. In addition, a detailed description of procedures for the propagation and expansion of the recombinant host cell clone, establishment of the seed stock and qualification of the seed stock should be provided. For information on cell banking procedures refer to Section II, C.

치료용 유전자를 포함하거나 포함하지 않은 바이러스를 치료용 벡터의 제조에서 시드로 사용하는 경우, 마스터 바이러스은행을 수립하고 특성분석할 것이 권장된다. 여기에는 아데노바이러스, 아데노연관바이러스, 헤르페스바이러스, 폭스바이러스 및 그 밖의 용해성·비용해성 바이러스에서 유래한 벡터가 포함된다. 의뢰자는 출발물질(즉, 플라스미드, 벡터, 올리고머 등)과 원천 벡터 또는 시드 벡터를 생산하는 데 사용한 분자적 방법을 기술하여야 한다. 시드 벡터의 유전적 완전성과 안정성(즉, 확인)을 확증하여야 하며, 벡터 시드의 생체활성을 입증하여야 한다. 생체활성 자료가 없는 경우에는 유전자의 발현을 평가하여야 한다.

When a virus, with or without a therapeutic gene, is used as a seed in the manufacture of a therapeutic vector, it is recommended that a Master Viral Bank be created and characterized. This would include vectors derived from adenovirus, adeno-associated virus, herpes virus, poxviruses, and other lytic and non-lytic viruses. The sponsor should describe the source materials, (i.e. plasmids, vectors, oligomers, etc.) and molecular methods used to produce the source or seed vector. The genetic integrity and stability (i.e. identity) of the seed vector should be confirmed and bioactivity of the vector seed should be demonstrated. In the absence of bioactivity data, expression of the gene should be assessed.

마스터 시드 스톡도 바이러스, 세균, 진균 및 마이코플라스마를 포함한 외래성 인자가 없음을 입증하여야 한다. 복제결함형 또는 복제선택형 벡터의 경우, 마스터 바이러스은행은 MVB 제조 중 오염 또는 재조합의 결과로 발생할 수 있는 복제가능 바이러스가 없음을 입증하여야 한다. 그 밖의 부적절한 바이러스에 대한 시험은 벡터와 벡터 바이러스 존재 하에서의 시험 수행 가능성에 따라 달라진다. 「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항(1993)」(58 FR 42974)을 배경 정보로 고려하여야 한다.

Master seed stocks should also be demonstrated to be free of adventitious agents, including virus, bacteria, fungi, and mycoplasma. In the case of replication-defective or replication-selective vectors, Master Viral Banks should be demonstrated to be free of replication-competent viruses, which may arise as a result of contamination or recombination during the generation of the MVB. Testing for other inappropriate viruses will depend upon the vector and feasibility of assays in the presence of vector virus. The "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993)" (58 FR 42974), should be considered as background information.

일반적인 시험 권고사항은 이어지는 항에서 논의한다. 열거한 시험이 모든 벡터 종류에 적용되는 것은 아니다. 의뢰자는 적절한 시험 계획서를 선택하여야 하며, 특정 시험의 적용 가능성에 의문이 있으면 CBER에 문의하여야 한다. 원료의약품(최종 제형이 아닐 수 있는 벌크 제품으로 정의)과 완제의약품(최종 제형 상태의 제품으로 정의)이 동일한 경우에는 한 벌의 시험만 필요함에 유의한다.

General testing recommendations are discussed in the sections that follow. Not all tests listed will be applicable to every vector class. Sponsors should choose appropriate testing protocols, and consult CBER if there are questions as to the applicability of a specific test. Note that if drug substance (defined as bulk product not necessarily in final formulation) and drug product (defined as product in its final formulation) are the same, then only a single set of tests is necessary.

아래에 열거한 특성에 대한 표준 시험법은 정량적이고 특이성과 감도가 적절하면 어느 것이든 사용할 수 있다. 시험법은 알려진 양의 표준 로트, 스파이킹 시료의 시험 또는 그 밖의 적절한 수단으로 밸리데이션하여야 하며, 시험법의 성능을 문서화한 자료를 IND에 제출하여야 한다.

Any standard assays for the properties listed below can be used if they are quantitative, and are of adequate specificity and sensitivity. Assay methods should be validated by testing of known amounts of reference lots, spiked samples, or other appropriate measures, and data documenting assay performance submitted to the IND.

여러 효소를 사용한 제한효소 지도작성 또는 PCR과 같은 방법에 의한 벡터 확인시험을 원료의약품에 대하여 실시하여야 한다(21 CFR 610.14 참조). 여러 구축물을 만드는 시설의 경우, 확인시험이 그 구축물들을 구별하고 교차오염을 검출할 수 있음을 검증하여야 한다.

Test for vector identity by methods such as restriction enzyme mapping with multiple enzymes or PCR should be performed on the drug substance (see 21 CFR 610.14). In the case of a facility making multiple constructs, it should be verified that the identity testing is capable of distinguishing the constructs and detecting cross-contamination.

외래성 인자 시험법은 시간이 지남에 따라 점점 더 민감하고 특이해지므로, 의뢰자는 이 정책을 향후 갱신할 수 있도록 여기에 제시한 방법 외의 시험법을 밸리데이션하는 자료를 축적할 것을 권장한다. 벡터 제품이 적절한 시험을 방해하는 경우, 예를 들어 용해성 바이러스 벡터가 외래성 바이러스 시험의 지시세포를 사멸시키는 경우에는, 동일한 배지와 그 밖의 시약을 사용한 병행 모의 배양으로 오염물질이 증식하도록 하거나 중화항체 존재 하에서 시험함으로써 일부 정보를 얻을 수 있다. 다음 시험을 실시하여야 한다.

As methods of testing for adventitious agents become increasingly sensitive and specific over time, sponsors are encouraged to accumulate data validating testing methods other than those indicated, to permit future updating of this policy. In cases in which a vector product interferes with appropriate assays, for example, a lytic viral vector that kills indicator cells in an assay for adventitious virus, some information may be obtained by parallel mock cultures using the same media and other reagents to allow outgrowth of a contaminant, or by assays in the presence of neutralizing antibody. The following tests should be performed:

역가 시험법은 제품 개발 과정 중에 밸리데이션하여야 한다. 삽입 유전자의 발현은 적절한 세포에 형질주입하고, 감도와 특이성이 특성분석된 적절한 시험법으로 활성 유전자 산물을 입증함으로써 확인할 수 있다. 가능한 경우 역가 시험은 발현된 유전자 산물의 존재만이 아니라 생물학적 활성을 측정하여야 한다. 예를 들어 효소 활성이 제안된 치료의 기반인 경우, 기질이 산물로 전환되는 것을 검출하는 효소 활성 시험이 효소의 에피토프를 검출하는 면역학적 시험보다 바람직하다. 정량적 역가 시험법이 없는 경우에는 정성적 역가 시험을 실시하여야 한다.

Potency assays should be validated during the product development process. Expression of the inserted gene can be determined by transfection of appropriate cells and demonstration of active gene product by an appropriate assay, characterized as to its sensitivity and specificity. Whenever possible, a potency assay should measure the biological activity of the expressed gene product, not merely its presence. For example, if enzymatic activity is the basis of the proposed therapy, an enzyme activity assay detecting conversion of substrate to product would be preferred over an immunological assay detecting epitopes on the enzyme. If no quantitative potency assay is available, then a qualitative potency test should be performed.

최종 용기 형태의 벡터 제품은 아래에 열거한 특성에 대하여 정량적이고 밸리데이션된 시험법으로 시험하여야 한다. 엔도톡신 시험과 일반 안전성 시험을 완제의약품(최종 제품)에 대하여 실시한 경우에는 원료의약품(벌크 제품)에 대하여 실시할 필요가 없다.

The vector product in final container form should be tested for the properties listed below by quantitative, validated assays. Tests for endotoxin and general safety if performed on a drug product (final product) need not be performed on drug substance (bulk product).

위의 일반 항에서 다룬 많은 제품 및 품질관리 고려사항은 플라스미드 DNA 제품에도 적절하다. 「감염병 예방 적응증을 위한 플라스미드 DNA 백신에 관한 고려사항(1996)」(61 FR 68269)도 유용한 참고자료가 될 수 있다. 일반적으로 플라스미드의 전체 염기서열 분석을 실시하여야 한다. 플라스미드는 RNA, 단백질 및 세균 숙주 DNA 오염물질의 존재, 제제 중 선형 및 초나선형 DNA의 양, 독성 화학물질의 존재와 관련하여 특성분석하고 기준을 설정하여야 한다. 에티디움 브로마이드와 같은 독성 화학물질은 생산 중 사용을 피하여야 한다.

Many product and quality control considerations covered in the general sections above are appropriate to plasmid DNA products. The "Points to Consider on Plasmid DNA Vaccines for Preventive Infectious Disease Indications (1996)", 61 FR 68269, may also be a useful reference. In general, complete sequencing of the plasmid should be performed. Plasmids should be characterized and specifications set with regard to the presence of RNA, protein, and bacterial host DNA contaminants, quantities of linear and supercoiled DNA in the preparation, and presence of toxic chemicals. Toxic chemicals such as ethidium bromide should be avoided during production.

「생물의약품 생산에 사용하는 세포주의 특성분석에 관한 고려사항」에서 밝힌 바와 같이, 환자에서 중대한 과민반응이 발생할 위험 때문에 생산 중 페니실린과 그 밖의 베타락탐계 항생제의 사용을 피할 것이 권장된다. 생산 중 항생제 선택을 사용하는 경우에는, 항생제 내성 형질이 환경 미생물로 불필요하게 확산될 위험을 피하기 위하여 임상에서 중요하게 사용되는 항생제에 내성을 부여하는 선택 표지를 사용하지 않는 것이 바람직하다. 또한 최종 제품 중 잔류 항생제는 가능한 경우 정량하여야 하며, 알레르기 가능성을 고려하여야 한다. 제조 중 항생제를 사용하는 경우 허가된 생물의약품의 표시기재 요건에 관하여 21 CFR 610.61(m)을 참조한다.

As stated in the "Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals," it is recommended that penicillin and other beta-lactam antibiotics be avoided during production, due to the risk of serious hypersensitivity reactions in patients. If antibiotic selection is used during production, it is preferable not to use selection markers which confer resistance to antibiotics in significant clinical use, in order to avoid unnecessary risk of spread of antibiotic resistance traits to environmental microbes. Also, residual antibiotic in the final product should be quantitated when possible, and the potential for allergy considered. See 21 CFR 610.61(m) concerning labeling requirements for approved biological products if antibiotics are used during manufacture.

환경 영향과 약물 내성 형질의 사용에 관하여는 「재조합 DNA 분자를 포함하는 연구에 관한 NIH 지침」 III-A-1-a항(59 FR 34496, 61 FR 59732로 개정)을 참조한다. 비항생제 선택 시스템도 사용할 수 있다.

Concerning environmental impact and the use of drug resistance traits, consult the NIH Guidelines for Research Involving Recombinant DNA Molecules, Section III-A-1-a (59 FR 34496, amended 61 FR 59732). Non-antibiotic selection systems can also be used.

플라스미드 벡터는 DNA 흡수를 촉진하기 위한 지질 제제, 국소마취제 또는 그 밖의 화학물질과 함께 투여될 수 있다. 제형화 중 그러한 촉진제를 첨가하는 경우, 최종 제품 중 그 양과 확인에 대한 기준을 설정하여야 한다. 지질 성분의 생산에 클로로포름과 같은 독성 유기용매를 사용하는 경우에는, 공정에서 이를 제거하여야 하고 로트 출하 기준에 잔류 용매 시험을 포함하여야 한다.

Plasmid vectors may be administered in conjunction with lipid preparations, local anesthetics, or other chemicals intended to facilitate DNA uptake. If such a facilitating agent is added during formulation, a specification for its amount and identity in the final product should be established. If toxic organic solvents such as chloroform are used in producing a lipid component, then processing should remove them and lot release specifications should include testing for residual solvent.

1. 복제가능 레트로바이러스 시험: 복제가능 레트로바이러스(RCR) 검출에 관한 다음 시험 체계는 현재 이용 가능한 정보에 근거한 현행 권고사항을 요약한 것이다. 이 체계는 현재 재평가 중이며, 변경된 가이던스는 이용 가능해지면 공개할 것이다. 레트로바이러스 노출 위험에 대한 지식이 제한적이고 생산 공정의 어느 시점에서든 재조합 RCR이 생성될 가능성이 있으므로, 생산의 여러 단계에서 시험할 것이 권장된다. 대체 시험법(예: 마커 레스큐)은 감도가 PG4 S⁺L⁻ 시험법과 비슷하면 허용된다. 특히 세포를 동결보존할 수 있는 경우에는 환자 투여 전에 시험을 완료하여야 하며, 그렇지 않은 경우에는 시험을 동시에 실시하여야 한다. 생산 중 발생한 사건에 관한 생물학적 정보를 얻기 위하여, 임상 로트에서 검출된 RCR의 분자적 특성분석도 권장된다.

1. Testing for replication competent retrovirus: The following testing scheme for detection of replication competent retroviruses (RCR) summarizes current recommendations based on information available at this time. This scheme is currently being reevaluated, and modified guidance will be made public when available. Testing at multiple stages in production is recommended due to the limited knowledge of the risks of retrovirus exposure and the possibility of generation of recombinant RCR at any point in the production process. Alternative assays (e.g. marker rescue) are acceptable if sensitivity is comparable to the PG4 S⁺L⁻ assay. Testing should be complete prior to patient administration, particularly if cells can be cryopreserved; otherwise testing should be performed concurrently. In order to gain biological information about events during production, molecular characterization of any RCR detected in clinical lots is also recommended.

2. 환자 모니터링: 레트로바이러스 관련 제품을 투여받은 환자는 RCR 노출에 대하여 모니터링하여야 한다. 지침은 CBER에 문의한다.

2. Patient monitoring: Patients given retrovirus-related products should be monitored for RCR exposure. Please consult CBER for guidance.

1. 입자 수 대 감염 단위의 측정: 아데노바이러스 기반 유전자치료 벡터의 환자 투여량은 현재 바이러스 입자, 플라크 형성 단위(PFU), 또는 복제결함을 상보하는 세포주에서 측정한 감염 단위(IU)를 산정하는 어떤 방법에 근거하고 있다(RCA 측정과 혼동하지 않도록 한다. 아래 2 참조). 아데노바이러스 입자 자체의 잠재적 독성을 고려하여, CBER은 환자 투여량을 입자 수에 근거하여 정할 것을 권고한다. 이 권고사항은 입자 수를 쉽고 재현성 있게 측정할 수 있다는 점도 반영한다. 그러나 일부 결과가 투여한 감염 단위 수의 함수일 가능성이 충분히 있으므로, 시험자나 의뢰자가 재현성 있고 유의미한 시험관내 감염성 시험법을 개발하고, 감염성 입자 대 총 바이러스 입자의 비에 적절히 엄격한 기준을 설정하는 것이 중요하다.

1. Measurement of particles vs. infectious units: Patient doses of adenovirus-based gene therapy vectors are presently based upon some method of enumerating viral particles, plaque forming units (PFU), or infectious units (IU) measured in cell lines complementing the replication defect (not to be confused with measurement of RCA; see Section 2 below). Given the potential toxicity of the adenoviral particles themselves, CBER recommends that patient dosing be based on particle number. This recommendation also reflects that particle number can be readily and reproducibly measured. However, since it is quite possible that some outcomes are a function of the number of infectious units administered, it is important for investigators or sponsors to develop in vitro infectivity assays which are reproducible and informative, and to set appropriately tight specifications on the ratio of infectious particles to total viral particles.

아데노바이러스 입자 측정은 일반적으로 게놈 DNA 정량에 근거한다. 소디움 도데실 설페이트 또는 그 밖의 바이러스 용해제 존재 하에서 260 nm에서의 흡광도를 사용하여 OD260으로부터 아데노바이러스 입자의 최대 수를 산출할 수 있다. 아데노바이러스가 아닌 핵산이 존재하면 입자 수가 부정확해질 수 있으므로 제조 및 바이러스 정제 공정 중 이를 최소화하여야 한다. 전자현미경 입자 계수도 바이러스 입자 산정에 사용되어 왔다.

Adenovirus particle measurement is commonly based on genomic DNA quantitation. Using the absorbance at 260 nm in the presence of sodium dodecyl sulfate or other virus lysing agents, the maximum number of adenoviral particles can be calculated from OD260. The presence of non-adenovirus nucleic acid may yield inaccurate particle numbers and should be minimized during the manufacturing and viral purification process. Electron microscope particle count has also been used for viral particle enumeration.

현재 아데노바이러스 벡터 제제의 역가는 보통 감염성 역가를 가리킨다. 역가 측정에 사용하는 세포는 흔히 생산 세포주이다. 바이러스 벡터의 차이는 증식 특성과 동태의 변화를 가져올 수 있다. 플라크법은 복제결함이 쉽게 상보되는 아데노바이러스 벡터에 효율적이다. 복제결함이 여러 개인 벡터는 형광항체 사용과 같은 대체 방법으로 역가를 측정하는 것이 더 용이할 수 있다. 두 시험법 모두 흡착 시간, 바이러스 응집 해소의 필요성, 안정성 등에 대한 최적화가 필요하다. 표준 야생형 바이러스 대조를 포함하면 서로 다른 벡터와 실험실 간 역가 비교가 쉬워질 수 있다.

Presently the titer of an adenovirus vector preparation usually refers to the infectious titer. The cell used for determining the titer is often the producer cell line. Differences in viral vectors may lead to changes in growth properties and kinetics. The plaque method is efficient for adenoviral vectors with an easily complemented replication defect. Vectors with multiple replication defects may be more readily titered by alternative methods such as use of fluorescent antibodies. Both assays require optimization for time of adsorption, need for deaggregation of virus, stability, etc. Inclusion of a standard wild type virus control may facilitate the comparison of titers between different vectors and laboratories.

현재 제품 중 바이러스 입자 대 생물학적 활성 바이러스의 비를 100:1 미만으로 하여 1상 시험에 사용할 것이 권장된다. 이 기준의 목적은 재조합 바이러스의 일관된 제조와 환자 투여량당 입자당 최고의 생체활성을 보장하고, 바이러스 구조단백질로 인한 독성 가능성을 제한하는 것이다. 새로운 시험법이 개발되고 밸리데이션되면, 기존 시험법과의 비교와 제품 특성분석에의 사용을 권장한다.

It is currently recommended that a ratio in the product of viral particles to biologically active virus of less than 100:1 be employed in phase I studies. The purpose of this specification is to ensure the consistent manufacture of recombinant viruses and the highest bioactivity/particle/ patient dose and to limit possible toxicity due to viral structural proteins. As new assays are developed and validated, their comparison to old ones and their use in product characterization is encouraged.

2. 복제가능 아데노바이러스의 검출: 아데노바이러스 벡터의 임상 로트에 RCA가 존재하면 아데노바이러스 감염의 가능성, 야생형 헬퍼 기능의 존재로 인한 의도하지 않은 벡터 복제, 숙주 염증반응의 악화 등 여러 안전성 우려가 제기된다. 이러한 사건과 그 밖의 잠재적 이상사례로 인한 안전성 위험은 적응증과 환자 집단에 따라 달라진다. 사람 야생형 또는 복제가능 재조합 아데노바이러스의 광범위한 복제를 지지하는 동물 모델이 없으므로, 비임상 안전성 시험은 본질적으로 RCA 관련 위험의 평가에 한계가 있다.

2. Detection of replication-competent adenovirus: The presence of RCA in clinical lots of adenovirus vector raises a variety of safety concerns, including the possibility of adenovirus infection, unintended vector replication due to the presence of wild-type helper function, and exacerbation of host inflammatory responses. The safety risks entailed by these events and other potential adverse events will differ depending on the indication and the patient population. Preclinical safety studies are inherently limited in assessment of RCA-related risks since there are no animal models that support extensive replication of human wild-type or replication competent recombinant adenovirus.

따라서 복제결함형으로 의도한 아데노바이러스 벡터는 복제가능 아데노바이러스(RCA)의 존재에 대하여 검사하여야 한다. RCA는 숙주 염기서열과의 재조합 또는 오염을 통해 제조공정의 여러 단계에서 발생할 수 있다. 제조 중 생성되는 RCA의 양은 벡터의 전반적 설계에 영향을 받는다. 복제선택형 아데노바이러스 벡터의 사용은 추가적인 고려사항을 제기하며 추가적이거나 다른 시험 전략을 요구할 수 있다. 그러한 경우는 CBER과 논의하여야 한다.

Therefore, adenovirus vectors intended to be replication-defective should be examined for the presence of replication-competent adenovirus (RCA). RCA may arise at multiple steps during the manufacturing process, through recombination with host sequences or by contamination. The amount of RCA generated during manufacture will be influenced by the overall design of the vector. Use of replication-selective adenovirus vectors raises additional considerations and may call for additional or different testing strategies. Such cases should be discussed with CBER.

현재로서는 세포배양/세포병변효과 방법으로 최종 벡터 제품에서 RCA를 검출하는 것이 바람직하다. 시험 접종물에 야생형 아데노바이러스 입자 수를 점차 줄여 가며 스파이킹하여 시험법의 감도를 밸리데이션할 것이 권장된다. RCA의 존재와 무관하게 높은 용량의 바이러스 접종물이 독성을 나타내므로 투입 감염다중도(MOI)는 신중히 선택하여야 한다. 또한 투입 MOI가 너무 높으면 벡터에 의해 RCA의 증식이 억제될 수 있음에 유의하여야 한다. 지시세포주에서 판독하기 전에 RCA 증식에 감수성인 세포, 예를 들어 A549 세포에서 1회 또는 2회의 블라인드 패시지를 실시하여 RCA를 증폭할 수 있다. 또한 시험법이 정량적일 것, 즉 환자 투여량에 존재하는 RCA의 수를 측정할 수 있을 것이 권장된다.

Detection of RCA in final vector product by a cell culture/cytopathic effect method is preferred at this time. Validation of assay sensitivity by spiking decreasing numbers of wild type adenovirus particles into the test inoculum is recommended. Input multiplicity of infection (MOI) should be carefully chosen because of toxicity of higher doses of virus inoculum unrelated to the presence of RCA. It should also be noted that too high an input MOI may lead to suppression of RCA outgrowth by the vector. One or two blind passages on cells permissive for growth of the RCA, for example A549 cells, may be performed to amplify RCA before reading out on an indicator cell line. In addition, it is recommended that the assay be quantitative, that is, able to determine the number of RCA present in any patient dose.

FDA의 종전 권고사항은 아데노바이러스 감염이 잠재적 위험으로 간주되는 환자에서 환자 투여량에 RCA가 1 pfu 또는 그에 상당하는 양을 초과하여 포함되지 않아야 한다는 것이었다. 그러나 FDA는 현재의 생산 기술과 제안된 투여 방식이 결합되면 이 권고사항이 지나치게 부담스러울 수 있음을 인식하고 있다. 따라서 의뢰자가 다른 기준을 제안하고자 하는 경우에는, 존재하는 RCA 수준이 의도한 환자 집단, 투여 경로 및 용량에 대하여 허용 가능한 위험임을 입증하는 자료를 제출하여야 한다. 생산 중 발생한 사건에 관한 생물학적 정보를 얻기 위하여, 현재로서는 임상 로트에 존재하는 RCA의 분자적 특성분석도 권장되며, 발생하는 재조합의 유형에 대하여 더 많이 알려질 때까지 현실적으로 가능한 한 철저히 실시하여야 한다.

Previous recommendations from the FDA have been that patient doses should contain no more than 1 pfu of RCA or equivalent in patients in whom adenovirus infection would be considered a potential risk. However, the agency recognizes that current production techniques in combination with proposed dosing schemes may make this recommendation prohibitively burdensome. Therefore, if sponsors wish to propose a different specification, data should be provided demonstrating that the level of RCA present represents an acceptable risk for the intended patient population, route of administration, and dose. In order to gain biological information about events during production, molecular characterization of any RCA present in clinical lots is also recommended at this time, and should be as thorough as is practical until more is known about the types of recombination that are occurring.

3. 아데노연관바이러스: AAV와 아데노바이러스의 연관성 때문에, 현재 마스터세포은행, 마스터 바이러스 시드 스톡 및 최종 제품에서 AAV 시험이 권장된다.

3. Adeno-associated virus: Because of the association of AAV with adenovirus, testing for AAV is currently recommended in the Master Cell Bank, the Master Virus Seed Stock, and the final product.

추가적인 종류의 바이러스 벡터 또는 핵산 벡터를 포함한 그 밖의 유전자 전달 시스템이 현재 개발 중이다. 새로운 시스템을 사용하는 의뢰자는 안전하고 효율적인 개발 과정을 촉진하기 위하여 제품 개발 초기에 CBER에 문의할 것을 권장한다.

Other gene delivery systems including additional types of viral or nucleic acid vectors are currently under development. Sponsors using new systems are encouraged to contact CBER early in product development, to facilitate a safe and efficient development process.

과거 CBER은 벡터의 모든 변경이 새로운 제품을 낳는 것으로 보아 새로운 IND의 제출을 요구하였다. 현재는 이 정책에 유연성을 허용할 수 있는 과학적 근거가 축적되고 있다. CBER의 목표는 환자 안전을 유지하면서 가능한 경우 시험을 간소화하고 문서화를 줄여 효과적인 치료법을 향한 진전을 촉진하는 것이다.

In the past, CBER has considered any change in a vector to result in a new product, and has requested submission of a new IND. There is now an accumulating body of scientific evidence that will permit flexibility in this policy. CBER's goal is to facilitate progress towards effective therapies by abbreviating testing and reducing documentation, whenever this can be done while preserving patient safety.

제품을 변경된 벡터로 보는 경우 IND 제출의 두 가지 측면이 영향을 받는다. 즉, 새로운 IND를 제출하여야 하는지에 관한 결정과, 검토를 위해 어떤 자료를 제출하여야 하는지에 관한 결정이다. 예를 들어 유전자 삽입부의 경미한 변경이나 항생제 내성 유전자의 변경과 같은 일부 변경은 반드시 새로운 IND나 전면적인 제품 재시험을 요구하지는 않는다. 모든 경우에 새로운 벡터의 유래를 기술하여야 하며 그 벡터는 출하시험 기준에 적합하여야 한다. 수집하여야 하는 그 밖의 자료는 벡터 변경의 정도와 성격에 따라 달라진다. 추가 비임상 시험의 필요성은 단순한 염기 변경 수가 아니라 벡터 생물학이 변화할 가능성에 따라 결정된다. 일부 경우에는 조직 국재화, 생식세포계열 변화 및 동물 약리/독성 시험이 선택적일 수 있다.

Two aspects of IND submission are affected by consideration of a product as a modified vector: the decision as to whether a new IND should be submitted, and the decision as to what data should be submitted for review. Certain changes, for example minor modifications in the genetic insert or changes in the antibiotic resistance gene, do not necessarily call for a new IND or for full product retesting. In all cases, derivation of a new vector should be described and the vector should meet the specifications for release testing. The other data which should be collected will vary with the degree and nature of the modifications to the vector. The need for additional preclinical testing is determined by the likelihood of altered vector biology, not just the number of nucleotide changes. In some cases, tissue localization, germ line alteration, and animal pharmacology/ toxicology studies may be optional.

대신 관련 안전성 시험은 벡터의 변경과 관련된 특정 안전성 우려에 초점을 둘 수 있다.

Instead, the relevant safety studies could focus on specific safety concerns related to changes in the vector.

경미한 변경을 포함한 여러 관련 벡터를 연구하는 경우, 이들은 「사람용 단클론항체 제품의 제조 및 시험에 관한 고려사항」 1997년 개정판(62 FR 9196)에 기술된 단클론항체 패널과 유사하게 하나의 패널의 구성원으로 볼 수 있다. 기술한 바와 같이 그러한 패널은 단일 IND 하에서 연구하고 단일 허가신청으로 제출할 수 있다. 3상 임상시험에는 모든 패널 구성원에 대한 경험을 일부 포함하여야 하며, 패널 전체에 대하여 유효성을 확립하여야 한다.

When a number of related vectors involving minor modifications are studied, they may be considered members of a panel, analogous to panels of monoclonal antibodies described in the "Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use," 1997 revision, 62 FR 9196. As stated, such panels could be studied under a single IND and submitted for approval in a single license application. Phase 3 clinical trials should include some experience with all panel members, and efficacy established for the overall panel.

벡터 변경은 CBER과 사안별로 논의하여야 한다. 의뢰자가 제품 또는 제품군에 대하여 시험과 IND 제출을 간소화하고자 하는 경우, 임상시험을 시작하기 전에 제안한 간소화 시험 체계의 적절성을 CBER과 함께 확인하여야 한다. 의뢰자가 제출하는 자료는 벡터의 특정 변경이 생체내 비교 시 그 거동을 변화시키는지, 따라서 완전한 시험을 계속 실시하여야 하는지를 확립하는 데 도움이 될 수 있다.

Vector modifications should be discussed with CBER case by case. If a sponsor wishes to abbreviate testing and IND submission for a product or product series, the sponsor should verify with CBER the adequacy of the proposed abbreviated testing scheme prior to initiating clinical trials. Data forthcoming from sponsors can help establish whether particular changes in vectors alter their behavior when they are compared in vivo, and therefore whether complete testing should continue to be performed.

비임상 시험은 임상시험 시작 전뿐 아니라 의약품 개발 전 과정에 걸쳐 사람의 반응을 예측하는 약리학적·독성학적 효과를 규명하기 위한 것이다. 이러한 시험의 목표에는 임상시험을 위한 안전한 개시 용량과 증량 방식의 규명, 독성 표적 장기 및 이러한 치료를 받는 환자에서 모니터링할 지표의 확인, 특정 세포치료제 또는 유전자치료제의 독성에 더 큰 위험이 있을 수 있는 집단의 결정이 포함된다.

Preclinical studies are intended to define the pharmacologic and toxicologic effects predictive of the human response, not only prior to initiation of clinical trials, but also throughout drug development. The goals of these studies include the following: to define safe starting doses and escalation schemes for clinical trials, to identify target organs for toxicity and parameters to monitor in patients receiving these therapies, and to determine populations which may be at greater risk for toxicities of a given cellular or gene therapeutic.

비임상 시험의 설계에서는 1) 투여할 세포 집단 또는 사용하는 벡터의 종류, 2) 임상 적응증과 제품 종류에 가장 관련성이 높은 동물종과 생리적 상태, 3) 의도한 용량, 투여 경로 및 치료 요법을 고려하여야 한다. 시험하여야 하는 지표는 아래에서 논의한다.

Design of preclinical studies should take into consideration: 1) the population of cells to be administered or the class of vector used, 2) the animal species and physiologic state most relevant for the clinical indication and product class, and 3) the intended doses, route of administration, and treatment regimens. Parameters which should be studied will be discussed below.

세포치료제 및 유전자치료제에 사용하는 제품은 독특하고 다양하므로, 통상적인 약리 및 독성 시험이 이러한 제제의 안전성과 생물학적 활성을 판단하기에 항상 적절하지는 않을 수 있다. 형질도입 유전자의 종 특이성, 바이러스 벡터에 의한 감염 감수성, 비교 생리학과 같은 사안을 이러한 시험의 설계에서 고려하여야 한다. 질병 적응증을 모사하는 이용 가능한 동물 모델은 이러한 제제가 임상시험에 진입하기 전에 충분한 안전성 및 유효성 자료를 모두 얻는 데 유용할 수 있다.

Due to the unique and diverse nature of the products employed in cellular and gene therapies, conventional pharmacology and toxicity testing may not always be appropriate to determine the safety and biologic activity of these agents. Issues such as species specificity of the transduced gene, permissiveness for infection by viral vectors, and comparative physiology should be considered in the design of these studies. Available animal models mimicking the disease indication may be useful in obtaining both sufficient safety and efficacy data prior to entry of these agents into clinical trials.

ICH 초안 가이드라인 S6 「생명공학 유래 의약품의 비임상 안전성 평가」(1997. 7. 16. ICH가 Step 4로 채택)는 3.1항에서 생명공학의약품 시험에서 우수실험실관리기준의 유연한 적용을 논의하고 있다. 품목허가를 뒷받침하는 주요 안전성 시험(예: 발암성, 생식독성)은 21 CFR 58에 규정된 기준에 따라 실시될 것으로 기대되나, 임상시험 진입을 뒷받침하는 시험이 GLP를 항상 엄격히 준수하지는 않을 수 있음을 인정한다.

The ICH Draft Guideline S6, "Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals," (Step 4, approved by ICH, 7/16/97) discusses in Section 3.1 the flexible application of Good Laboratory Practices in testing of biotechnology products. Although pivotal safety studies in support of marketing (e.g. carcinogenicity, reproductive toxicology) are expected to be conducted in compliance with the regulations as outlined in 21 CFR part 58, it is recognized that studies in support of entry into clinical trials may not always strictly adhere to GLP.

이러한 경우에는 규정의 원칙을 가능한 한 가깝게 따라야 하며, 일탈이 발생한 경우에는 예상되는 임상 적용에 미치는 영향을 평가하고 FDA에 제출하는 보고서에서 논의하여야 한다.

In these cases, the principles of the regulation should be followed as closely as possible, and where deviations occur, they should be evaluated for impact on the expected clinical application, and discussed in the report submitted to the agency.

제품이 이전에 폭넓은 임상 경험이 있는 물질과 비교 가능하거나, 다른 발현 카세트를 삽입하더라도 벡터의 독성이나 전파에 영향을 주지 않을 것으로 예상되는 경우에는 덜 광범위한 비임상 시험으로 충분할 수 있다(위 VII항 참조).

If a product is comparable to agents for which there is wide previous clinical experience, or for which the insertion of a different expression cassette is not expected to influence the toxicity or the dissemination of the vector, less extensive preclinical testing may suffice (see Section VII, above).

비임상시험 계획은 시험 개시 전에 CBER 담당자와 논의할 것을 권장한다. 환자를 신속하게 등록해야 하는 임상 계획은 미리 예상하여 그에 앞서 적절한 비임상 시험을 실시하여야 한다.

It is recommended that plans for preclinical studies be discussed with representatives from CBER prior to their initiation. Clinical plans requiring rapid enrollment of patients should be anticipated and preceded by adequate preclinical testing.

모든 세포치료 또는 유전자치료 체계에 대해 질환 동물 모델이 있는 것은 아님을 인정한다. 이러한 물질의 비임상 약리 및 안전성 시험에는 이용 가능한 동물 모델 중 가장 적절하고 약리학적으로 관련성 있는 모델을 사용하여야 한다. 관련 동물 종이란 치료에 대한 생물학적 반응이 사람의 반응을 모방할 것으로 예상되는 종이다. 예를 들어, 사람 사이토카인을 발현하는 벡터는 그 사이토카인이 해당 사이토카인 수용체에 사람 수용체에서 보이는 것과 비슷한 친화도로 결합하고, 사람에서 예상되는 것과 비슷한 약리 반응을 일으키는 동물 종에서 시험하는 것이 가장 좋다.

It is recognized that animal models of disease may not be available for every cellular or gene therapy system. Preclinical pharmacologic and safety testing of these agents should employ the most appropriate, pharmacologically relevant animal model available. A relevant animal species would be one in which the biological response to the therapy would be expected to mimic the human response. For example, a vector expressing a human cytokine would best be tested in an animal species in which that cytokine binds to the corresponding cytokine receptor with affinity comparable to that seen with human receptors, and initiates a pharmacologic response comparable to that expected in humans.

임상시험에서 계획한 형질도입 절차, 증식 또는 유전자 변형 세포의 용량, 투여 경로를 비임상에서 평가하여야 한다. 동물에서의 약리 시험은 변형 세포의 생체내 기능, 생존 기간 및 적절한 이동(trafficking)에 관한 유용한 정보를 제공할 수 있다.

The transduction procedure, dose of expanded or genetically modified cells, and route of administration planned for the clinical trial should be evaluated preclinically. Pharmacologic studies in animals may provide useful information regarding the in vivo function, survival time and appropriate trafficking of the modified cells.

증식, 활성화 또는 유전자 변형된 체세포의 안전성 시험은 적절한 동물 모델에서 실시하여야 한다. 위에서 언급한 이들 세포의 생체내 분포, 이동 및 지속성에 관한 자료도 안전성 측면에서 평가하여야 한다. 최소한 투여 동물의 일반 건강 상태, 혈청 생화학 및 혈액학적 프로파일을 모니터링하여야 한다. 표적 조직은 조직병리학적 변화를 현미경으로 검사하여야 한다.

Safety testing of expanded, activated, or genetically modified somatic cells should be conducted in an appropriate animal model. Data on distribution, trafficking, and persistence of these cells in vivo mentioned above should be evaluated for safety implications as well. At a minimum, treated animals should be monitored for general health status, serum biochemistry, and hematologic profiles. Target tissues should be examined microscopically for histopathological changes.

현재 사람 대상자에게 직접 투여하기 위한 여러 가지 벡터가 개발되고 있다. 이러한 벡터를 직접 투여하는 경우 여러 가지 안전성 우려가 있으며, 여기에서 이를 다룬다. 리포좀과 같은 첨가 물질이나 pH 또는 염 함량의 변화가 독성이나 분포 양상을 바꿀 수 있으므로, 아래에 기술하는 생식선 조직 시험을 포함한 모든 독성 시험과 국재(localization) 시험에는 최종 제형화된 제품을 사용하여야 한다.

A number of different vectors are currently in development for direct administration to human subjects. Direct administration of any of these vectors presents a number of safety concerns that will be addressed here. All toxicity and localization studies, including studies of gonadal tissue described below, should use the final formulated product, since added materials such as liposomes, or changes in pH or salt content, may alter the toxicity or distribution pattern.

각 벡터 하위 분류에 특정한 우려 사항은 일반적으로 사안별로 다루며, CBER와의 논의를 권장한다.

Specific concerns for each vector subclass will generally be handled on a case-by-case basis, and discussion with CBER is encouraged.

벡터의 투여 경로는 생체내 독성에 영향을 줄 수 있다. 비임상시험의 안전성 평가는 가능한 한 임상시험과 동일한 투여 경로와 방법으로 실시하여야 한다. 소동물 종에서 이를 달성하기 어려운 경우에는 임상에서 사용할 계획인 방법과 유사한 투여 방법을 권고한다. 예를 들어, 목화쥐(cotton rat)나 마우스에서 비강내 투여로 아데노바이러스 벡터를 폐내 점적하는 것은 기관지경을 통한 직접 폐내 투여의 허용 가능한 대안이다.

The route of administration of vectors can influence toxicity in vivo. Safety evaluation in the preclinical studies should be conducted by the identical route and method of administration as in the clinical trial whenever possible. When this is difficult to achieve in a small animal species, a method of administration similar to that planned for use in the clinic is advised. For example, intrapulmonary instillation of adenoviral vectors by intranasal administration in cotton rats or mice is an acceptable alternative to direct intrapulmonary administration through a bronchoscope.

비임상 독성 평가에 사용할 동물 종은 벡터와 관련된 야생형 바이러스에 의한 감염 및 병리학적 후유증에 대한 감수성과 함께, 벡터 구조체의 생물학적 활성 모델로서의 유용성을 기준으로 선정하여야 한다. 설치류 모델이 해당 바이러스 분류에 의해 유발되는 병리에 감수성이 있다면, 비인간 영장류 대신 설치류 모델이 유용할 수 있다. 임상 적응증의 동물 모델에서 벡터의 활성을 평가하는 경우, 같은 모델에서 안전성 자료를 수집하여 질환 관련 생리 변화나 기저 병리가 벡터에 대한 반응에 미치는 영향을 평가할 수 있다.

The species of animal chosen for preclinical toxicity evaluations should be selected for its sensitivity to infection and pathologic sequelae induced by the wild-type virus related to a vector, as well as its utility as a model of biologic activity of the vector construct. Rodent models, rather than non-human primates may be useful if they are susceptible to pathology induced by the virus class. When evaluating the activity of a vector in an animal model of the clinical indication, safety data can be gathered from the same model to assess the contribution of disease-related changes in physiology or underlying pathology to the response to the vector.

비임상에서 시험하는 벡터의 용량은 시험관내 및 생체내 시험의 예비 활성 자료를 근거로 선정하여야 한다. 무영향 용량, 명백한 독성 용량 및 몇 가지 중간 용량을 정하여야 하며, 무처치 동물이나 부형제 투여 동물과 같은 적절한 대조군을 포함하여야 한다. 공급량이 제한되어 있거나 본래 독성이 낮은 제품은 비임상시험에서 시험하는 최고 용량으로 최대 투여 가능 용량을 투여할 수 있다. 비임상 안전성 평가에는 임상시험에서 제안한 용량과 동등한 용량을 최소 하나, 이를 초과하는 증량 단계를 최소 하나 포함하여야 한다. 적절한 안전역을 정하는 데 필요한 사람 용량의 배수는 사용하는 벡터의 분류와 동물 모델의 사람과의 관련성에 따라 달라질 수 있다. 체중 또는 전체 체표면적 중 적절한 것을 기준으로 용량을 환산하면 종 간 비교가 쉬워진다.

The doses of vectors studied preclinically should be selected based on preliminary activity data from studies both in vitro and in vivo. A no-effect level dose, an overtly toxic dose, and several intermediate doses should be determined, and appropriate controls, such as naive or vehicle-treated animals, should be included. For products in limited supply or with inherently low toxicity, a maximum feasible dose may be administered as the highest level tested in the preclinical studies. Preclinical safety evaluations should include at least one dose equivalent to and at least one dose escalation level exceeding those proposed for the clinical trial; the multiples of the human dose required to determine adequate safety margins may vary with each class of vector employed and the relevance of the animal model to humans. Scaling of doses based on either body weight or total body surface area as appropriate facilitates comparisons across species.

이렇게 얻은 정보는 임상시험에 사용할 벡터의 안전역을 정하고 허용 가능한 용량 증량 계획을 가늠하는 데 사용할 수 있다.

Information generated can be used to determine the margin of safety of the vector for use in the clinical trial, as well as to gauge an acceptable dose-escalation scheme.

투여 동물의 일반 건강 상태, 혈청 생화학 및 혈액학을 모니터링하여야 하며, 조직은 조직학적 병리 변화를 검사하여야 한다.

Treated animals should be monitored for general health status, serum biochemistry, and hematology, and tissues should be examined for pathological changes in histology.

벡터를 제안된 부위에 투여한 후 그 분포를 확인하기 위해 설계한 국재 시험도 권장된다. 가능한 한 의도한 투여 경로를 사용하여야 한다. 벡터가 광범위하게 퍼지는 영향을 나타내는 "최악의 경우" 시나리오로서 별도의 동물군에 정맥내 투여할 수 있다. 표적 부위뿐 아니라 정상 조직, 주변 조직 및 원위 조직으로의 유전자 전달을 가능한 한 가장 민감한 검출 방법으로 평가하여야 하며, 유전자 지속성 평가도 포함하여야 한다. 선정하는 용량 수준은 독성 시험에 사용한 용량을 따라야 한다. 비정상적이거나 예상하지 못한 국재가 관찰되면 그 유전자가 발현되는지, 그 존재가 병리학적 영향과 관련되는지를 확인하는 시험을 실시하여야 한다.

Localization studies, designed to determine the distribution of the vector after administration to its proposed site, are also recommended. Whenever possible, the intended route of administration should be employed. Additional groups of animals may be treated intravenously, as a "worst-case" scenario representing the effects of widespread vector dissemination. Transfer of the gene to normal, surrounding, and distal tissues as well as the target site should be evaluated using the most sensitive detection methods possible, and should include evaluation of gene persistence. Dose levels selected should follow those used in toxicity testing. When aberrant or unexpected localization is observed, studies should be conducted to determine whether the gene is expressed and whether its presence is associated with pathologic effects.

치료 유전자 산물이 의도한 조직 또는 의도하지 않은 조직에서 발현되면 예상하지 못한 독성이 나타날 수 있으므로, 이를 비임상시험에서 다루어야 한다. 유전자 산물이 유도하는 염증, 면역 또는 자가면역 반응이 우려될 수 있다. 동물 시험은 이러한 반응이 나타날 수 있을 만큼 충분한 기간 동안 실시하여야 한다. 바이러스 단백질이나 전이유전자 단백질에 대한 숙주 면역 반응은 임상에서 반복 투여 시 그 유용성을 제한할 수 있다.

Expression of the therapeutic gene product in intended or unintended tissues may result in unexpected toxicities, which should therefore be addressed in preclinical studies. Inflammatory, immune, or autoimmune responses induced by the gene product may be of concern. Animal studies should be conducted over a sufficient duration of time to allow development of such responses. Host immune responses against viral or transgene proteins may limit their usefulness for repeated administration in the clinic.

직접 투여용 벡터의 경우 생식세포로 벡터가 전달될 위험을 고려하여야 한다. 동물의 정소 또는 난소 검체는 가능한 한 가장 민감한 방법으로 벡터 서열을 분석하여야 한다. 생식선에서 신호가 검출되면, 세포 분리나 제자리(in situ) PCR 또는 그 밖의 기법을 포함하되 이에 한정되지 않는 기법을 사용하여 그 서열이 간질 조직이 아닌 생식세포에 존재하는지 확인하는 추가 시험을 실시하여야 한다. 생식세포로의 벡터 유입을 확인하기 위한 분석용 정액 검체는 마우스를 포함한 성숙 동물에서 채취할 수 있다(G.D. Snell, et. al., Anat. Rec., 90:243-253, 1944; J.C. Kile, Jr., Anat. Rec., 109:109-117, 1951).

With vectors for direct administration, the risk of vector transfer to germ cells should be considered. Animal testicular or ovarian samples should be analyzed for vector sequences by the most sensitive method possible. If a signal is detected in the gonads, further studies should be conducted to determine if the sequences are present in germ cells as opposed to stromal tissues, using techniques that may include but are not limited to cell separations or in situ PCR, or other techniques. Semen samples for analysis can be collected from mature animals including mice (G.D. Snell, et. al., Anat. Rec., 90:243-253, 1944; J.C. Kile, Jr., Anat. Rec., 109:109-117, 1951), for determination of vector incorporation into germ cells.

유전자치료를 받을 대상자의 면역 상태는 특히 바이러스 벡터의 경우 제품의 위해성-유익성 분석에서 고려하여야 한다. 면역 저하 환자를 제외하면 임상 계획서가 지나치게 제한되는 경우, 잠재적 안전성 위험을 평가하기 위해 비임상시험에서 면역 억제 동물, 유전적 면역 결핍 동물 또는 신생 동물을 사용할 수 있다.

Immune status of the intended recipients of a gene therapy should be considered in the risk-benefit analysis of a product, particularly for viral vectors. If exclusion of immunocompromised patients would unduly restrict a clinical protocol, immune suppressed, genetically immunodeficient, or newborn animals may be used in preclinical studies, to evaluate any potential safety risks.

새로운 분류의 유전자치료와 체세포치료가 개발됨에 따라 우려 사항과 시험 방법은 변할 가능성이 매우 높다. 위 가이던스는 검토하여야 할 사항의 유형을 개괄하고, 새로운 기술이 등장할 때 이를 분석하는 틀을 제공한다. CBER는 이 분야의 정책이 발전하는 동안 학계와 산업계 및 그 밖의 이해관계자의 의견과 제안을 환영한다.

As new classes of gene therapies and somatic cell therapies are developed, concerns and methods of testing will most likely change. The above guidance outlines the types of issues that should be examined and provides a framework for analysis of new technologies as they emerge. CBER encourages comments and suggestions from the academic and commercial communities and other interested parties during the evolution of policy in this area.